在养殖业中，抗生素的不合理使用导致细菌耐药性、环境污染以及药物残留等问题日益严峻[1]。因此，寻找绿色、安全的抗生素替代品成为目前研究的重点。葡萄糖氧化酶（GOD）和乳酸菌制剂作为安全、无毒副作用的绿色添加剂成为目前关注的热点之一。GOD属于氧化还原酶类，是一种能够专一氧化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢（H2O2）的需氧脱氢酶。葡萄糖酸具有类似酸化剂的功能，可以增强肠道内的酸性，促进乳酸菌等有益菌的生长；而H2O2则可以抑制肠道内致病菌的生长与繁殖[2]。乳酸菌制剂在提高饲料转化率及动物生产性能方面具有较好的效果。目前，相关研究主要集中在单一的GOD或乳酸菌制剂作为替代抗生素添加剂在肉鸡上的应用，对两者联合应用效果的相关研究较少。因此，本试验以AA肉鸡为研究对象，探讨GOD和乳酸菌制剂联合添加对AA肉鸡生长性能及免疫功能的影响，为肉鸡养殖过程中联合使用GOD和乳酸菌制剂提供参考。1材料与方法1.1试验材料1日龄AA肉鸡购自北京爱拔益加家禽育种有限公司。GOD由黑龙江卫诺恩生物公司提供。乳酸菌制剂为嗜酸性乳酸杆菌，活菌数1.5×109 CFU/g，购自北京新水利康科技发展有限责任公司。1.2试验日粮试验采用玉米-豆粕型基础日粮，参照NRC（1994）肉鸡饲养标准进行配制。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T001表1基础日粮组成及营养水平项目1~21 d22~42 d原料组成/%玉米61.2064.00豆粕32.0028.50鱼粉1.500.03豆油1.303.40赖氨酸0.070.09DL-蛋氨酸0.180.15氯化胆碱0.100.14石粉1.221.12磷酸氢钙1.131.27食盐0.300.30预混料1.001.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.8412.81粗蛋白/%20.4719.36钙/%0.870.91总磷/%0.680.64有效磷/%0.430.35赖氨酸/%1.271.14蛋氨酸/%0.520.48蛋氨酸+半胱氨酸/%0.810.75注：1.每千克预混料为日粮提供：VA 150 KIU、VD3 100 KIU、VE 300 IU、VK3 30 mg、VB1 30 mg、VB2 100 mg、VB6 60 mg、VB12 0.3 mg、烟酸1 000 mg、泛酸2 00 mg、叶酸20 mg、生物素2 mg、铁1 200 mg、铜40 mg、锰1 000 mg、锌1 000 mg、碘20 mg、硒2 mg。2.营养水平均为计算值。1.3试验设计选取1日龄健康的体重为（43.66±0.92）g的AA肉鸡1 200只，随机分成4组，每组6个重复，每个重复50只。Ⅰ组为空白对照组正常饮水；Ⅱ组为GOD组（饮水中添加0.1% GOD）；Ⅲ组为乳酸菌组（每天每只鸡饮水中添加1.5×105 CFU/g乳酸菌固体制剂）；Ⅳ组为GOD+乳酸菌组（饮水中添加0.1% GOD+1.5×105 CFU/g乳酸菌固体制剂）。试验期42 d，1~21 d为试验前期，22~42 d为试验后期。每天9：00将乳酸菌固体制剂片使用少量生理盐水稀释，溶于自来水，饲喂前停水2 h，1 h内饮完。1.4饲养管理试验在宣化区瑞康畜禽养殖有限公司进行。肉鸡采取网上平养，提供独立的料桶、饮水器，自由采食与饮水。料桶每天清理1次，饮水器早、晚清洗2次。采取人工补充光照：前3 d连续光照72 h，第4 d至试验结束每天提供光照23 h。第1 w舍内温度为33~35 ℃，以后每周降低2~3 ℃，至第4 w温度约为22~24 ℃。免疫程序：1日龄进行新城疫-H9亚型流感油苗注射和新城疫滴鼻免疫，8日龄进行H5+H7灭活苗注射和新城疫Ⅳ疫苗滴鼻免疫，21日龄进行新城疫Ⅳ疫苗饮水免疫。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能在试验第1、2、42 d以各重复为单位对肉鸡进行空腹称体重，称体重前禁饲10 h，准确记录每天的耗料量，计算试验全期的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。ADFI=耗料量/试验天数(1)ADG=(末重-初重)/试验天数(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.5.2免疫器官指数第21、42 d时，每个重复随机取3只体重相近的肉鸡，宰杀放血，取胸腺、脾脏、法氏囊，剪去附着的脂肪和组织，采用滤纸吸干血水，称量质量，记录。免疫器官指数=免疫器官鲜重(g)/宰前活重(kg)(4)1.5.3血清抗体水平分别在试验7、14、21、28、35、42 d，每个重复随机取3只体重相近的肉鸡，翅静脉无菌采血，分离血清，-20 ℃冰箱保存。采用红细胞微量凝集和凝集抑制方法检测新城疫和H9禽流感抗体水平。1.5.4血清免疫球蛋白分别在试验21 d和42 d，每个重复随机选取5只接近平均体重的肉鸡屠宰前无菌采血，分离血清，-20 ℃保存。样品送石家庄金域检验中心采用免疫比浊法测定免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG）含量。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验前期，与Ⅰ组相比，Ⅲ组和Ⅳ组肉鸡末重显著增加（P0.05），各组肉鸡的平均日采食量无显著差异（P0.05），Ⅳ组肉鸡的平均日增重比Ⅰ组提高2.95%（P0.05），料重比降低4.65%（P0.05）。试验后期，与Ⅰ组相比，Ⅳ组肉鸡初重和末重均显著增加（P0.05），平均日增重显著提高（P0.05），平均日采食量与Ⅰ组相比提高1.32%（P0.05）。全程试验结果显示，各试验组肉鸡的平均日采食量与Ⅰ组无显著差异（P0.05），Ⅳ组肉鸡末重和平均日增重与Ⅰ组相比显著增加（P0.05），料重比与Ⅰ组比降低1.24%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T002表2葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡生长性能的影响项目初重/g末重/g平均日采食量/(g/d)平均日增重/(g/d)料重比1~21 d试验Ⅰ组49.27±5.25804.41±37.58b50.37±0.4339.64±0.97b1.29±0.02a试验Ⅱ组48.74±4.12871.13±40.13ab50.23±0.7039.69±0.67ab1.27±0.02ab试验Ⅲ组48.72±5.01912.10±38.46a50.68±0.5739.78±0.98ab1.26±0.04ab试验Ⅳ组49.38±5.16940.82±41.37a50.38±0.2340.81±0.73a1.23±0.02b22~42 d试验Ⅰ组837.32±41.43b2 673.45±41.43b157.30±4.3589.11±1.15b1.77±0.06试验Ⅱ组915.13±37.32ab2 757.12±67.51ab157.30±4.3591.03±1.48b1.74±0.05试验Ⅲ组931.42±35.63ab2 773.38±63.72ab157.30±4.3590.22±1.63ab1.75±0.02试验Ⅳ组986.73±40.32a2 856.82±71.58a159.37±4.0691.18±1.68a1.75±0.051~42 d试验Ⅰ组49.27±5.252 673.45±41.43b103.84±2.2564.38±0.80b1.61±0.04试验Ⅱ组48.74±4.122 757.12±67.51a104.68±2.1565.36±0.81ab1.60±0.03试验Ⅲ组48.72±5.012 773.38±63.72a103.90±1.9565.00±1.06ab1.60±0.04试验Ⅳ组49.38±5.162 856.82±71.58a104.87±2.0866.01±0.43a1.59±0.04注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，试验前期，与Ⅰ组相比，Ⅳ组胸腺指数显著提高51.57%（P0.05），脾脏指数显著提高27.54%（P0.05），法氏囊指数显著提高17.37%（P0.05）。试验后期，Ⅳ组法氏囊指数最高，比Ⅰ组显著提高62.50%（P0.05），各试验组胸腺指数和脾脏指数与Ⅰ组均无显著差异，但有增高的趋势（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T003表3葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数脾脏指数法氏囊指数21 d42 d21 d42 d21 d42 d试验Ⅰ组2.23±0.48b2.14±0.530.69±0.11b1.09±0.221.67±0.64b0.88±0.23b试验Ⅱ组2.49±0.34a2.18±0.610.76±0.16a1.12±0.161.78±0.23a1.28±0.27a试验Ⅲ组3.37±0.78a2.24±0.610.78±0.06a1.14±0.201.82±0.59a1.27±0.34a试验Ⅳ组3.38±0.86a2.30±0.470.88±0.04a1.21±0.091.96±0.09a1.43±0.38a2.3葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡血清特异性抗体水平的影响（见表4、表5）由表4和表5可知，与Ⅰ组相比，各试验组均显著提高21 d肉鸡血清中新城疫抗体指数（P0.05）；Ⅲ组和Ⅳ组显著提高28 d肉鸡血清中新城疫抗体指数（P0.05）；Ⅲ组显著提高28、35、42 d肉鸡血清中H9抗体指数（P0.05），而Ⅳ组显著提高21、28、35、42 d肉鸡血清中H9抗体指数（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T004表4葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡血清新城疫抗体效价的影响组别7 d14 d21 d28 d35 d42 d试验Ⅰ组3.00±0.823.84±0.753.83±0.41b4.17±0.75b4.83±0.755.50±0.54试验Ⅱ组2.90±0.883.90±0.844.33±0.52a4.67±0.82ab5.12±0.755.67±0.52试验Ⅲ组3.25±0.894.25±0.965.00±0.82a5.00±0.82a5.50±0.846.00±0.58试验Ⅳ组3.33±0.874.20±0.844.83±0.75a5.17±0.75a5.50±0.546.14±0.69log210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T005表5葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡血清禽流感H9抗体效价的影响组别7 d14 d21 d28 d35 d42 d试验Ⅰ组2.12±0.753.33±1.123.80±0.45b4.33±0.32a4.50±0.55b4.83±0.41b试验Ⅱ组2.20±1.003.80±0.844.14±0.40b4.83±0.35ab5.33±0.42ab5.33±0.52ab试验Ⅲ组2.40±0.593.60±0.894.23±0.39b5.29±0.46a5.43±0.39a5.57±0.39a试验Ⅳ组2.25±0.443.83±0.754.50±0.34a5.33±0.32a5.50±0.44a5.71±0.36alog22.4葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡血清免疫球蛋白的影响（见表6）由表6可知，试验前期，与Ⅰ组相比，各试验组肉鸡血清中IgA和IgG含量均显著提高（P0.05），Ⅳ组肉鸡血清IgA和IgG含量比对照组分别显著提高37.10%和29.09%（P0.05）。试验后期，与Ⅰ组相比，Ⅳ组肉鸡血清IgA含量提高9.76%（P0.05），各试验组肉鸡血清中IgG含量均显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.23.010.T006表6葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡免疫球蛋白的影响组别IgAIgG21 d42 d21 d42 d试验Ⅰ组0.35±0.04b0.41±0.023.30±0.24b3.90±0.32b试验Ⅱ组0.44±0.06a0.48±0.054.39±0.82a4.79±0.75a试验Ⅲ组0.39±0.04a0.42±0.104.49±0.93a4.89±0.88a试验Ⅳ组0.48±0.05a0.45±0.064.26±0.39a4.86±0.66a单位g/L3讨论3.1葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡生长性能的影响荆新堂等[3]研究发现，在饮水中添加100 U/L葡萄糖氧化酶能够提高肉鸡的生长性能和养殖效率。研究表明，饮水中添加液态葡萄糖氧化酶显著提高1~42 d和22~42 d肉鸡的平均日增重，显著降低肉鸡的料重比和死淘率，平均日采食量无显著变化[4]。在日粮中添加葡萄糖氧化酶同样具有较好的效果。汤海鸥等[5]研究发现，在日粮中添加不同剂量的葡萄糖氧化酶可显著提高1~42 d肉鸡的平均日增重，降低料重比。其机制可能是葡萄糖氧化酶能够降低肉鸡肠道的pH值，提高优势菌群数量，降低有害菌比例，优化肠道菌群，提高饲料转化率，从而提高生长性能[6]。乳酸菌制剂对提高肉鸡生长性能具有显著效果。蒋磊等[7]在817肉鸡日粮中添加不同剂量的乳酸菌制剂，结果发现，乳酸菌制剂可以显著提高肉鸡日增重和成活率，降低料重比。徐基利[8]研究表明，日粮中添加不同种类和不同剂量的乳酸菌可以不同程度地提高28 d内肉鸡平均日增重，显著降低料重比。采用冻干粉剂型的乳酸菌喂养AA白羽肉鸡显著降低死亡率和料重比[9]。本试验中，葡萄糖氧化酶组和乳酸菌制剂组对肉鸡21 d平均日增重和料重比无显著影响，而联合使用肉鸡的平均日增重提高2.95%，料重比降低4.65%，说明葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂联合使用时在促进生长方面具有协同效应。试验全程，葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂联合组肉鸡的平均日增重和料重比，相比单独添加葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂也有提高的趋势。于会民等[10]研究表明，与单一葡萄糖氧化酶添加组相比，葡萄糖氧化酶与粪肠球菌联合应用显著提高肉鸡的平均日增重，与本试验研究结果一致。3.2葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂对肉鸡免疫功能的影响邢焕等[11]研究发现，以葡萄糖氧化酶和酵母硒为主要成分的混合添加剂能够显著提高肉鸡21 d法氏囊指数、42 d胸腺指数，与王洪军[12]的研究结果相似。张彩凤[13]研究发现，乳酸菌和酵母菌复合菌剂能够提高肉鸡42日龄的脾脏指数。研究表明，添加1%、2%的乳酸冻干菌能够显著提高肉鸡胸腺、脾脏的指数和机体的细胞免疫和体液免疫水平[14]。本试验中，乳酸菌制剂组、葡萄糖氧化酶+乳酸菌制剂组能够显著提高肉鸡21 d胸腺、脾脏和法氏囊指数以及42 d的法氏囊指数，表明葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂能够显著改善肉鸡免疫器官指数。多数免疫球蛋白具有抗体活性，其含量的变化与动物机体的健康状况和免疫力密切相关[15]。李向群等[16]研究表明，葡萄糖氧化酶能够显著提高肉仔鸡血清中IgA和IgG含量。Zhang等[17]研究发现，在肉鸡日粮中添加复合益生菌制剂显著提高肉鸡血清中IgA和IgM的含量。张彩凤等[18]研究发现，与对照组相比，在饮水中添加鸡源乳酸菌液能够显著提高肉鸡血清中IgA和IgG的含量。本试验结果显示，与对照组相比，葡萄糖氧化酶组、乳酸菌制剂组、葡萄糖氧化酶+乳酸菌制剂组显著提高21 d和42 d肉鸡血清IgG的含量。此外，葡萄糖氧化酶+乳酸菌制剂组显著提高21 d肉鸡血清IgA的含量。尽管各试验组对42 d肉鸡血清IgA未产生显著影响，但是总体看葡萄糖氧化酶和乳酸菌制剂联合使用在一定程度上提高肉鸡的免疫功能，并且具有一定的协同作用。研究表明，在肉鸡基础日粮中添加5×105 CFU/g乳酸菌显著提高了42日龄肉鸡新城疫抗体效价[19]。田浪等[20]研究发现，在日粮中添加300 g/t复合益生菌制剂显著提高禽流感H5疫苗的抗体滴度，同时增加抗体水平整齐度。本试验结果显示，乳酸菌制剂组、葡萄糖氧化酶+乳酸菌制剂组血清新城疫抗体效价在21 d和42 d时差异显著，血清禽流感H9抗体效价在21、28、35、42 d也显著提高。因此，葡萄糖氧化酶联合乳酸菌制剂可以提高肉鸡的免疫器官指数及血清中免疫球蛋白含量，提高新城疫及禽流感抗体水平，延长其抗体效价的高峰期，从而增强动物机体免疫功能。4结论葡萄糖氧化酶与乳酸菌制剂联合应用能够有效提高肉鸡的生长性能，改善免疫功能。