口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是一种由口蹄疫病毒引起的高接触性动物传染病，主要侵害家畜中的偶蹄动物[1-3]。FMD共7种血清型，我国常见的血清型为O、A型和亚洲1型[4-5]。小反刍兽疫（peste des petits ru-minants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的一种急性、烈性传染病，以小反刍动物的坏死性口炎、结膜炎、高稽留热、腹泻和肺炎等为主要临床症状[6-8]。口蹄疫和小反刍兽疫均为OIE法定报告的动物疫病[9]，也是我国一类重大动物疫病[10]，为强制免疫病种[11]。新疆始终将口蹄疫和小反刍兽疫防控作为防疫工作的重点[12-13]。本研究对比2018年采用单独免疫方法与2019、2020年采用联合免疫方法免疫羊群的抗体检测结果，验证羊群口蹄疫（O-A二型）灭活苗和小反刍兽活疫苗联合免疫的效果及可行性，为建立适合的免疫方法提供参考。1材料与方法1.1试验动物选取昌吉州辖区内7个地区散养的约1.5岁龄成年母羊2 106只，2018~2020年分别为696、707、703只。1.2试验材料2018~2020年口蹄疫（O-A二型）灭活疫苗均购自兰州中农威特生物科技股份有限公司，批号分别为：D180503J、D190104J、D190805J；4 ℃保存。2018~2020年小反刍兽疫活疫苗均购自新疆天康生物股份有限公司，批号分别为：2018039-2、2018031-1、2020027-1；－20 ℃保存。1.3试剂与仪器主要试剂：口蹄疫O、A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（兰州兽研生物科技有限公司），ID Screen小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒（法国ID-VET）。均4 ℃保存。主要仪器：全波长酶标仪（北京普朗新技术有限公司）、台式冷冻离心机（长沙英泰仪器有限公司）、电热恒温培养箱（宁波江南仪器厂）。1.4试验方法1.4.1单独免疫方法2018年采用单独免疫方法：每只羊颈部肌肉注射口蹄疫（O-A二型）灭活疫苗1 mL，14 d后在另一侧皮下注射小反刍兽疫苗1头份；免疫注射28 d颈静脉采血，分析血清中口蹄疫和小反刍兽免疫抗体水平。1.4.2联合免疫方法2019、2020年对辖区内散养羊改用联合免疫方法。每只羊颈部肌肉注射口蹄疫（O-A二型）灭活疫苗1 mL，另外一侧颈部皮下注射小反刍兽疫活疫苗1头份。免疫7 d内观察羊群的精神、食欲、体温及有无运动障碍、有无局部或全身反应或死亡情况；免疫注射28 d颈静脉采血，分离血清，检测口蹄疫和小反刍兽免疫抗体水平。1.4.3抗体检测方法采用液相阻断ELISA方法检测口蹄疫O型、A型抗体效价；采用ID Screen小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒检测小反刍兽疫抗体效价。操作均按照试剂盒说明书进行。2结果与分析2.1临床观察免疫接种后，对所有试验羊进行连续观察7 d，观察结果显示，单独免疫及联合免疫的所有羊均未出现精神萎靡、采食量下降、体温升高等免疫应激反应。2.22018~2020年口蹄疫和小反刍兽疫检测结果（见表1~表3）由表1~表3可知，2018年上、下半年昌吉州各地区口蹄疫的整体平均免疫抗体合格率分别为87.50%、83.80%，小反刍兽疫上、下半年的整体平均免疫抗体合格率分别为78.85%、78.14%；2019年上、下半年昌吉州各地区口蹄疫的整体平均免疫抗体合格率分别为96.45%、91.42%，小反刍兽疫上、下半年的整体平均免疫抗体合格率分别为91.37%、83.58%；2020年上、下半年昌吉州各地区口蹄疫的整体平均免疫抗体合格率分别为91.18%、92.60%，小反刍兽疫上、下半年的整体平均免疫抗体合格率分别为92.03%、84.40%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.012.T001表12018年7个地区的口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体合格率Tab.1Qualified rate of FMD and PPR antibodies in seven regions in 2018项目口蹄疫小反刍兽疫上半年下半年上半年下半年检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%合计69660987.5072461083.8069654978.8572454778.14地区11008888.0010810597.221006969.001089184.26地区21009090.0011611296.551007979.0011610187.07地区3998484.851018281.19999292.931018483.17地区41008989.001007777.001008989.001007878.00地区51009292.00967477.081009191.00966264.58地区61008080.001028987.251006363.001029694.12地区7978688.661017170.30976668.041013534.65XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.012.T002表22019年7个地区的口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体合格率Tab.2Qualified rate of FMD and PPR antibodies in seven regions in 2019项目口蹄疫小反刍兽疫上半年下半年上半年下半年检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%合计70768296.4571165091.4270764691.3771158081.58地区1948994.6810710598.13948590.4310710396.26地区2102102100.001019796.041029290.201019493.07地区3989495.921019695.05989394.901018887.13地区410410096.15102102100.001049490.381027169.61地区51029896.0810110099.011029896.081017574.26地区610710295.33996666.671079185.05996868.68地区71009797.001008484.001009393.001008181.00XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.012.T003表32020年7个地区的口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体合格率Tab.3Qualified rates of FMD and PPR antibodies in seven regions in 2020项目口蹄疫小反刍兽疫上半年下半年上半年下半年检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%检测数/只阳性数/只阳性率/%合计70364191.1874468992.6070364792.0374462884.40地区110410298.081029694.121049086.5410210098.02地区2928289.131009797.00928693.481009090.00地区31029694.121009898.0010210098.041008080.00地区41009494.00100100100.001009797.001008787.00地区51018685.151039794.171018887.131038279.61地区61019291.0911110291.891019897.0311110796.40地区71038986.411279977.951038885.441278264.57上述数据均达到国家要求的70%，说明昌吉州整体免疫效果较好。但每次检测7个地区中均出现个别地区抗体合格率未达到国家要求的情况，说明存在局部免疫效果不佳的状况，一些地区存在疫情散发风险。2.32018~2020年不同地区检测结果对比（见表4、表5）由表4可知，2018、2019以及2020年口蹄疫免疫抗体合格率均较高，分别为85.65%、93.86%和92.22%，口蹄疫抗体免疫合格率符合农业农村部要求。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.012.T004表42018~2020年口蹄疫免疫抗体水平年平均值Tab.4Average annual FMD antibody levels in 2018~2020年份地区1地区2地区3地区4地区5地区6地区7平均值2018年92.6193.2583.0283.0084.5483.6379.4885.652019年96.4098.0295.4998.0897.5581.0090.5093.862020年96.1093.0796.0697.0089.6691.4982.1892.22%2019、2020年口蹄疫合格率均高于2018年，说明联合免疫效果优于单独免疫效果。由表5可知，2018~2020年小反刍兽疫合格率均较高，分别为76.99%、86.46%和88.59%，小反刍兽疫抗体免疫合格率符合国家要求。2018~2020年小反刍兽疫合格率呈逐年上升趋势，说明小反刍兽疫联合免疫效果优于单独免疫的效果。2018、2019年部分地区小反刍兽疫抗体水平出现波动，可能与羊群新购入未进行及时免疫等情况有关。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.012.T005表52018~2020年小反刍兽疫免疫抗体水平年平均值Tab.5Average annual PPR antibody levels in 2018~2020年份地区1地区2地区3地区4地区5地区6地区7平均值2018年76.6383.0488.0583.5077.7978.5651.3576.992019年93.3591.6491.0280.1585.1776.8787.0086.462020年92.2991.7489.0292.0083.3796.7275.0188.59%3讨论口蹄疫和小反刍兽疫是我国一类动物疫病，是国家强制免疫的重点病种。新疆养殖业主要以牛羊为主，口蹄疫和小反刍兽疫疫情的发生风险较高，防控压力巨大[14]。以昌吉州为例，平均每年开展两次集中免疫，每次约免疫羊口蹄疫217.52万只，羊小反刍兽疫实免62.36万只，群体免疫密度均高于96.00%[15]。羊的口蹄疫和小反刍兽疫以往采用分开单独免疫方法，但这种方式不仅增加了兽医工作人员的工作量，且容易因重复免疫使免疫动物产生应激，影响畜牧生产。若两种疫苗能够采用联合免疫方法，既能够解放劳动力，也能够提高动物福利[16]。目前，国内有关于口蹄疫和小反刍兽疫联合免疫效果评估的试验研究较为少见，口蹄疫和小反刍兽疫免疫效果的评估均为单独免疫进行[17]。因此，在新疆进行两种疫苗联合免疫效果的研究，具有重要的科研价值和推广意义。2018年昌吉州辖区内散养羊群采用传统免疫方法免疫，2019和2020年昌吉州为加强口蹄疫和小反刍兽疫的免疫工作，采用联合免疫方法免疫。本研究结果显示，与2018年相比，2019年和2020年口蹄疫和小反刍兽疫的免疫抗体合格率均有所提升，说明使用联合免疫方式进行免疫抗体水平优于2018年传统免疫方式。随着免疫方法不断优化，免疫抗体水平整体结果较为理想，达到降低防疫人员劳动量的目的，并且可确保昌吉州口蹄疫和小反刍兽疫防控效果。4结论口蹄疫（O-A型）灭活苗和小反刍兽活疫苗对羊进行联合免疫优于单独免疫的效果，整体免疫抗体的合格率均达到国家规定的70%以上，达到预期效果。联合免疫可降低基层防疫人员的劳动强度，也降低了畜群的应激反应发生风险，保障了动物福利，可应用于临床生产实践推广。