牛球虫病是因球虫寄生于牛肠道引起的原虫病，呈世界性分布[1]，主要临床表现为出血性肠炎。患牛出现腹泻、贫血、消瘦、生长受阻、免疫力下降、生产性能下降、脱水等症状，严重可导致死亡。牛球虫病是牛养殖业常见病之一，多发于春秋两季的低湿牧场[2-3]。牛球虫病多流行于小牛；成年牛呈隐性感染，感染卵囊数超10万个时，即出现典型临床表现[4]。粪便是犊牛感染的主要来源，粪便污染垫草和饲料也可引起小牛感染[5]。调查显示，奶牛球虫感染率为95.1%，其中犊牛最易感[6]。李豪等[7]调查我国部分地区的43个奶牛场，其中39个场检测出球虫。倪晓婷等[8]调查宁夏3个牛场的球虫感染情况，感染率分别为40.74%、28.11%和13.67%；检出12种艾美耳属球虫，柱状艾美耳球虫为优势虫种。文崇利等[9]检测内尼里、地中海及摩拉等3个品种牛群的粪便，发现各品种牛均对球虫易感；青年牛和犊牛的感染率分别为1.3%、35.7%。牛球虫病对畜牧业造成巨大损失[10]。因此，牛球虫病的调查和防治尤为重要。本研究调查邯郸地区某牛场球虫的感染状况及种类，确定该牛场球虫的优势虫种，以期为该牛场球虫病的预防和治疗提供参考。1材料与方法1.1样本来源样本来自2019年冬季和2020年春季的邯郸某牛场，选择5个年龄段的奶牛和肉牛（公、母各半）：0~1月龄、2~6月龄、7~12月龄、1~3岁及3岁以上。每组随机采样30份。1.2试剂与仪器主要仪器：ZEISS显微镜、NIS-Elements Viewer软件（ZEISS公司）；80-2型离心机（北京冠普佳能科技有限公司）；恒温培养箱（北京富瑞恒创科技有限公司）；麦氏虫卵计数板（北京卓川电子科技公司）。主要试剂：2.5%重铬酸钾溶液（山东西亚化学股份有限公司）、饱和盐水。1.3测定指标及方法1.3.1样本处理采样时间选择清晨（温度低，卵囊发育缓慢），采集被检牛群新鲜粪便50~100 g，装入密封袋，标记牛的体况、编号、年龄，4 ℃保存。每份被检粪便50 g与粪样体积的5~6倍的水混匀，经80、200目铜筛过滤，3 600 r/min离心5 min，取沉淀与饱和盐水混匀；混合液3 600 r/min离心5 min，取最表层液体滴于载玻片，400倍光镜下观测。1.3.2卵囊收集与培养适量阳性球虫粪便加水混匀，双层过滤后3 600 r/min离心5 min，取沉淀加饱和盐水搅匀，3 600 r/min离心5 min。吸取离心管中的表面液体，加6~10倍水搅匀离心5 min，取沉淀加入2.5%重铬溶液，清洗沉淀物。平皿内放入收集的卵囊，27~28 ℃培养。每隔6 h观察卵囊的情况，待其完全孢子化，记录所用时间。1.3.3球虫卵囊计数取2 g阳性球虫粪便，加入58 mL饱和盐水混匀。抽取混合液至麦氏计数室，显微镜下计算1 cm方格内的球虫卵囊总数，计算两刻度室里卵囊数的平均值，乘以200，得到每g粪中的卵囊数（OPG值）[11]。1.3.4判定指标感染率：出现球虫卵囊的样本数占所检份数的百分比。感染强度：运用McMaster's method，计算其OPG值。检出率：待全部卵囊孢子化后进行定种。检出率为每种球虫卵囊与总球虫卵囊数量的比值。检出率高的虫种即为该牛场的优势虫种。1.3.5虫种鉴定将孢子化后的卵囊液制片。在40×10倍带有测微尺的显微镜下，观察其外形特征。根据卵囊、孢子囊和子孢子的大小、微细结构、形态、颜色、卵囊及孢子囊内是否存在颗粒或残体，完成孢子化所用时间等鉴定虫种。2结果与分析2.12019、2020年不同品种、不同年龄牛的球虫感染率（见表1、表2）由表1、表2可知，2019年冬季和2020年春季，奶牛的球虫总感染率分别为13.33%和16.00%，肉牛的分别为12.00%和14.00%；在不同年龄段中，3岁龄以上的牛感染率最低，2~6月龄的牛感染率最高。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T001表12019年冬季不同品种、不同年龄牛的球虫感染率Tab.1Coccidia infection rates of different breeds and ages of cattle in winter 2019组别0~1月2~6月7~12月1~3岁3岁以上总感染率奶牛6.6726.6723.336.673.3313.33肉牛6.6720.0023.336.673.3312.00%XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T002表22020年春季不同品种、不同年龄牛的球虫感染率Tab.2Coccidia infection rates of different breeds and ages of cattle in spring 2020组别0~1月2~6月7~12月1~3岁3岁以上总感染率奶牛10.0030.0020.0010.0010.0016.00肉牛6.6723.3323.3310.006.6714.00%2.22019、2020年冬季不同年龄的奶牛、肉牛球虫感染强度（见表3、表4）由表3可知，2019年冬季，不同年龄的奶牛中，2~6月龄的奶牛OPG值最大，为5 000；3岁以上的奶牛OPG值最小，为602。不同年龄的肉牛中，1~3岁的肉牛OPG值最大，为4 963；3岁以上的肉牛OPG值最小，为610。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T003表32019年冬季不同年龄的奶牛、肉牛球虫感染强度（OPG）Tab.3Intensity of Coccidia infection in dairy cows and beef cattle of different ages in the winter of 2019 (OPG)组别0~1月2~6月7~12月1~3岁3岁以上强度范围奶牛1 8605 0004 8803 000602100~17 000肉牛2 2004 7584 9524 963610100~17 000由表4可知，2020年春季，不同年龄的奶牛中，7~12月龄的奶牛OPG值最大，为10 000；3岁以上的奶牛OPG值最小，为809。不同年龄的肉牛中，2~6月龄的肉牛OPG值最大，为8 450；3岁以上的肉牛OPG值最小，为680。春季的感染强度高于冬季。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T004表42020年春季不同年龄的奶牛、肉牛球虫感染强度（OPG）Tab.4Intensity of Coccidia infection in dairy cows and beef cattle of different ages in spring 2020 (OPG)组别0~1月2~6月7~12月1~3岁3岁以上强度范围奶牛6 6008 03010 0005 880809120~20 000肉牛4 8508 4507 9604 630680100~20 0002.3邯郸地区某牛场不同种类的球虫检出率（见表5）由表5可知，在感染的阳性牛中，共检查到8种艾美耳属球虫。最常见的是牛艾美耳球虫和邱氏艾美耳球虫。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T005表5邯郸地区某牛场不同种类的球虫检出率Tab.5Detection rate of different species of Coccidia in a cattle farm in Handan area项目2019年冬季2020年春季检查卵囊总数/个100100椭圆艾美耳球虫/%1713亚球形艾美耳球虫/%13邱氏艾美耳球虫/%3036阿拉巴艾美耳球虫/%20牛艾美耳球虫/%3742加拿大艾美耳球虫/%10柱状艾美耳球虫/%93奥博艾美耳球虫/%332.4邯郸地区某牛场不同种类的球虫在各年龄段牛的感染率（见表6）由表6可知，在感染的牛场中，2~6月龄牛感染率最高，1~3岁的牛感染率最低。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.01.015.T006表6邯郸地区某牛场不同种类的球虫在各年龄段牛的感染率Tab.6Infection rate of Coccidia of different species in cattle of different ages in a cattle farm in Handan Area项目0~1月2~6月7~12月1~3岁3岁以上椭圆艾美耳球虫5.8225.5123.3504.65亚球形艾美耳球虫4.1119.8016.552.456.30邱氏艾美耳球虫6.1527.3522.642.783.24阿拉巴艾美耳球虫3.2418.6615.321.212.82牛艾美耳球虫6.2228.7326.661.423.24加拿大艾美耳球虫4.1522.3420.570.682.82柱状艾美耳球虫1.1217.6517.2001.57奥博艾美耳球虫3.8519.3815.3004.64%3讨论各年龄段牛的感染状况中，3岁以上的牛感染率较低，2~6月龄的牛感染率却非常高，说明该牛场牛球虫主要感染犊牛，符合牛球虫病的发病特点。这种现象可能与牛体自身的抵抗力等有关。该牛场的犊牛与成年牛混养，也使犊牛感染率增高。因此，应将犊牛和成年牛分别养殖，母牛哺育小牛后，乳房应保持干净，水源和肥料也应卫生、清洁，防止粪便污染。春季牛球虫感染率高于冬季，且春季球虫的感染强度高于冬季，与文献[12]报道一致。主要原因为春季温暖多雨，牛舍内较潮湿，且牛混养数量多，卫生条件不佳，导致牛感染球虫病。因此，定期对牛舍进行消毒，保持牛舍清洁、干燥、通风，对控制和预防牛球虫病具有重大意义。同时，应重视营养供应，保持饲料的平衡性，增强牛的身体机能。本研究中鉴定得到8种牛艾美耳属球虫，与刘俊伟等[13]研究结果一致；但因品种、采样数量、采样季节不同以及饲养管理的影响，个别种的卵囊量度和细微结构出现差别，部分病牛同时感染多种球虫，牛、邱氏、椭圆艾美耳球虫的感染率较高，最优势种为牛艾美耳球虫。该牛场球虫感染率低，但感染强度较高，平均OPG大于1 000。因此，兽医及工作人员应重视牛球虫病的防治工作，采取“预防为主，防治结合”的综合性防治措施，一旦发现病牛，及时隔离、检疫、药物治疗。可选用氨丙啉、盐霉素、磺胺脒片等驱虫药进行驱虫治疗，达到良好的治愈效果[5,14-16]。4结论春季的球虫感染率、感染强度均高于冬季。奶牛的感染率高于肉牛。不同年龄段的奶牛和肉牛中，2~6月龄的奶牛和肉牛球虫感染率最高，3岁龄以上的感染率最低。该牛场的优势虫种为牛艾美耳球虫。