我国饲料原料资源缺乏，“人畜争粮”问题日益严重。因此，开发非粮型饲料资源替代常规饲料原料成为未来饲料行业发展的趋势。沈世华教授研究团队（中科院植物重点实验室）利用杂交育种结合现代生物技术，选育出富含蛋白质的饲料型杂交构树[1]。杂交构树含有丰富的钙质和动物体所需的氨基酸，粗蛋白质含量高，叶片和枝条粗蛋白含量分别为26%、16%。杂交构树枝叶利用率高，适用于喂养猪[2-3]、牛[4-6]、羊[7]、鸡[8]等畜禽，是一种优质的高蛋白质饲料。在肉鸡的基础日粮中添加适量发酵构树叶，肉鸡的生产性能及大部分饲粮营养成分（粗蛋白质、粗灰分、钙和磷）的表观代谢率和养分消化率均无明显变化[9-10]。使用构树发酵饲料饲喂三黄鸡，其粗蛋白质、粗纤维及粗脂肪的表观消化率分别比对照组提高22.53%、21.68%和17.01%[11]。在肉鸡基础日粮中添加发酵构树叶粉，AA肉仔鸡的腹脂率、皮脂厚、肌间脂肪宽降低，肌肉滴水损失率和烹饪损失率减少，改善鸡肉肉品风味[8,12]。由于杂交构树粗蛋白质、粗脂肪含量高[13]，氨基酸含量丰富[14]，可能对家禽胸肌、腿肌发育及肌肉氨基酸、脂肪酸组成产生较大的影响。本研究以宁都三黄鸡为试验对象，通过分析胸肌、腿肌发育及脂肪酸、氨基酸组分等指标，探究基础日粮中添加发酵构树粉对三黄鸡生长及肉品质的影响，为杂交构树饲粮在家禽生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计与试验日粮宁都三黄鸡由江西省国华禽业有限责任公司提供。随机挑取48只体重相近、健康的40日龄宁都三黄鸡（公、母各半），分为2组，每组8个重复，每个重复3只。对照组宁都三黄鸡饲喂基础日粮（粉状饲料），试验组用7%发酵杂交构树粉[8]替代基础日粮。试验期35 d。试验期间三黄鸡可自由采食、饮水，参照相应的免疫程序进行免疫接种。基础日粮参考NRC（1994）配制。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米61.65代谢能/(MJ/kg)12.76豆粕29.92粗蛋白质/%20.00鱼粉2.99赖氨酸/%0.89豆油2.33蛋氨酸/%0.44食盐0.18蛋氨酸+半胱氨酸/%0.70石粉1.14苏氨酸/%0.63磷酸氢钙1.13色氨酸/%0.19氯化胆碱0.26钙/%0.80DL-蛋氨酸0.15有效磷/%0.41微量元素0.20多维0.05注：1.微量元素和多维为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 20 IU、VK3 2 mg、VB1 4 mg、VB2 8 mg、VB5 40 mg、VB6 4 mg、VB12 0.02 mg、生物素0.15 mg、叶酸1.0 mg、D-泛酸11 mg、胆碱700 mg、铜10 mg、铁80 mg、锰80 mg、锌75 mg、碘0.40 mg、硒0.30 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2试验材料发酵杂交构树粉原料组成见表2。杂交构树发酵过程在宜春强微生物科技有限公司的指导下进行。将粉碎的杂交构树粉（水分含量80%）、麸皮、糖蜜、微生物制剂混合，打包，室温下储存7 d，自然发酵。杂交构树购自江西盛康农业科技有限公司。发酵用菌制剂（枯草芽孢杆菌数≥2×109 CFU/g、乳酸杆菌数≥2×109 CFU/g、产朊假丝酵母菌数≥4×109 CFU/g）由宜春强微生物科技有限公司提供。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T002表2发酵构树粉原料组成原料组成含量合计100.00杂交构树82.63麸皮16.53糖蜜0.83微生物菌剂0.01%1.3测定指标及方法1.3.1体重及胸肌、腿肌发育指数试验第74 d晚8：00三黄鸡禁饲，第75 d早8：00空腹称重，翅静脉采血，断颈处理，分离胸、腿肌肉。计算胸肌率和腿肌率。胸肌率=m1/m×100%(1)腿肌率=m2/m×100%(2)式中：m1为胸肌重量（g）；m2为腿肌重量（g）；m为禁食后体重（g）。1.3.2肉品质pH值：屠宰后将胸、腿肌装于自封袋中，放在4 ℃冰箱中，24 h后使用pH计测定胸肌、腿肌的pH值。滴水损失率：分离约8 cm×4 cm×1.5 cm三黄鸡胸肌、腿肌肉样各1块，精确称量，记作W1。用绳拴住肌肉样品一端，密封在食品专用袋内，袋内保留足够空间，避免样品与食品袋边缘接触，保持样品垂直向下悬空状态，放入4 ℃保鲜柜中悬挂24 h。取出肌肉样品，轻擦样品表面的水分并称量，记为W2。计算滴水损失率。滴水损失率=(W1-W2)/W1×100%(3)剪切力：将采集的新鲜肌肉样品装入干净的自封袋，置于4 ℃冰箱中，平放贮存熟化48 h，取出肉样，在室温下升至室温后（约1 h），将温度计插入肌肉中心部位，置于80 ℃水浴中加热，至温度计显示70 ℃，立即从水浴锅取出肉样。待肉样冷至室温，从自封袋中取出肉样，沿肌纤维的方向修剪肉样，胸肌修剪成为3 cm×2 cm×1 cm的长条，腿肌修剪成2 cm×1 cm×0.5 cm的长条。在室温条件下，将肉样置于嫩度仪上，在每块肉样的3个不同部位，按垂直肌纤维方向用嫩度仪切割，记录切割肉样所需的剪切力，每个样品测定3次，取平均值。1.3.3肌纤维直径按肌纤维走向取胸肌（中段）适量样品（1 cm×1 cm×1 cm）置于4%福尔马林溶液中。将肌肉组织块使用乙醇（50%、70%、80%、95%和100%）脱水，包埋在石蜡中，切成薄片（4 μm）并附着到载玻片上。将载玻片使用苏木精和eosion（H＆E）染色，在10×40倍光学显微镜下，每个样品随机测量50根肌纤维直径，求平均值。1.3.4氨基酸分析将0.1 g冻干肌肉样品粉末装入氨基酸水解管中，加入10 mL盐酸（6 mol/L）水解，置于-20 ℃冰箱中，冷冻处理10 min，充氮气、封口，置于110 ℃干燥箱水解22~24 h。冷却、混匀、开管，将所有溶液转入容量瓶（25 mL）中，冲洗（0.02 mol/L HCl）水解管1~2次，定容至25 mL。移取1 mL溶液于10 mL离心管，鼓入氮气，水浴温度设为65 ℃，蒸发至干。移取1 mL 0.02 mol/L HCl于离心管，待充分溶解管内干物质后，过滤上机分析。由全自动氨基酸分析仪（日本日立）系统程序自动计算1 g样品中各氨基酸的含量。1.3.5脂肪酸分析称取试样60 mg，精确至0.1 mg。依照国标GB/T 17376—2008中的方法测定，吸取上面有机层相，用于后续GC/MS分析。利用气相色谱/质谱联用仪（GC/MS- QP2010，日本岛津公司）分析甲酯化衍生化后的样品，绘制总离子流图（TIC图）。从总离子流图中，提取相对应化合物的MS图谱（每个色谱峰代表1种化合物），利用NIST147质谱数据库进行检索对比，结合MS图中的特征碎片离子对相应化合物进行定性分析。根据总离子流图总峰面积归一化法原理，计算三黄鸡胸、腿肌肉脂肪中各种脂肪酸的含量。具体操作由GC/MS系统程序自动计算，由待测组分峰面积与所有峰面积和的百分比计算1 g样品中各脂肪酸的含量。1.4数据统计与分析数据利用SAS 9.1.3统计软件中的One-way ANOVA程序进行单因素方差分析。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵构树粉对宁都三黄鸡体重及胸肌、腿肌发育指数的影响（见表3）由表3可知，7%发酵构树粉对宁都三黄鸡体重、胸肌重、腿肌重、胸肌率和腿肌率均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T003表3发酵构树粉对宁都三黄鸡体重及胸腿肌发育指数的影响项目体重/g胸肌重/g胸肌率/%腿肌重/g腿肌率/%P值0.225 70.255 60.191 70.659 90.144 1对照组1 148.06±23.09107.52±2.009.21±0.28177.82±6.8915.15±0.35试验组1 113.35±14.73100.14±5.898.71±0.24183.17±9.6915.95±0.38注：同列数据肩标无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）。2.2发酵构树粉对宁都三黄鸡胸肌、腿肌肉品质的影响（见表4）由表4可知，添加7%发酵构树粉对宁都三黄鸡胸肌pH值、滴水损失率和剪切力均无显著影响（P0.05）；对腿肌pH值、剪切力无显著影响（P0.05），有提高腿肌滴水损失率的趋势（P=0.091 6）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T004表4发酵构树粉对宁都三黄鸡胸肌、腿肌肉品质的影响项目胸肌腿肌pH值滴水损失率/%剪切力/NpH值滴水损失率/%剪切力/NP值0.460 20.319 80.702 70.217 20.091 60.591 0对照组6.85±0.081.36±0.2431.11±2.566.59±0.171.12±0.2741.29±3.50试验组6.92±0.041.83±0.3929.73±2.446.83±0.061.89±0.3338.07±4.712.3发酵构树粉对宁都三黄鸡肌纤维直径的影响（见图1~图4）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.F001图1宁都三黄鸡胸肌组织学观察（400×）（a） 对照组 （b） 试验组10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.F002图2发酵构树粉对宁都三黄鸡胸肌肌纤维直径的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.F003图3宁都三黄鸡腿肌肌肉组织学观察（400×）（a） 对照组 （b） 试验组由图1~图4可知，与对照组相比，添加7%发酵构树粉可显著降低三黄鸡胸肌肌纤维直径（P0.05），对三黄鸡腿肌肌纤维直径无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.F004图4发酵构树粉对宁都三黄鸡腿肌肌纤维直径的影响2.4发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌肌肉氨基酸组分的影响（见表 5）由表5可知，添加7%发酵构树粉可显著升高胸肌Gly和Cys的含量（P0.05），显著降低Pro的含量（P0.05）；对腿肌中各氨基酸组分无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T005表5添加发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌肌肉氨基酸组分的影响项目胸肌腿肌对照组试验组P值对照组试验组P值牛磺酸（Tau）0.610±0.1050.867±0.1790.244 524.900±3.20021.340±2.0300.369 4天冬氨酸（Asp）270.841±5.804273.748±4.2330.694 2223.871±11.422221.597±5.0990.859 4苏氨酸（Thr）138.965±3.074141.059±2.5000.607 6114.698±6.184114.146±2.7950.936 7丝氨酸（Ser）135.887±2.514136.911±2.0930.760 7123.014±6.438119.769±2.5730.649 8谷氨酸（Glu）383.725±8.929386.860±6.6740.784 3339.687±19.840333.917±8.6120.795 1甘氨酸（Gly）240.245±4.572b252.976±1.982a0.028 6260.298±14.345261.029±11.2760.968 8苯丙氨酸（Ala）258.228±5.285264.394±3.2740.344 7226.166±11.783225.319±5.3630.949 1缬氨酸（Val）169.872±3.656172.864±2.3770.508 2135.366±6.723135.549±2.9840.980 7胱氨酸（Cys）11.248±0.127b12.217±0.250a0.010 110.760±0.72412.183±0.7600.205 0蛋氨酸（Met）72.928±1.52473.868±1.1530.633 260.699±3.06961.761±1.4360.760 4异亮氨酸（Ile）142.010±3.181144.252±2.2130.575 8114.707±5.862115.271±2.8860.933 0亮氨酸（Leu）237.615±5.176241.343±3.8710.576 8196.844±10.100196.133±4.7520.950 5酪氨酸（Tyr）70.160±1.55471.545±1.3140.511 458.330±3.27658.351±1.5180.995 6苯丙氨酸（Phe）93.294±2.04294.869±1.4730.545 779.450±4.02579.041±1.7890.927 8赖氨酸（Lys）241.631±5.196244.548±4.2390.672 8199.904±10.573200.124±5.1120.985 4组氨酸（His）96.640±1.60894.335±1.6680.343 159.193±3.18058.740±2.4600.912 6精氨酸（Arg）150.545±3.163153.844±2.1840.410 9133.067±6.735133.459±2.8760.958 3羟脯氨酸（Hypro）10.454±0.74212.271±1.7400.332 431.069±2.85630.175±3.3100.842 2脯氨酸（Pro）115.819±2.445a0.000±0.000b0.000 0127.229±6.126121.544±4.5700.474 1注：同行数据相同指标数据肩标无字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；表6与此同。ng/g2.5发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌肌肉脂肪酸组分的影响（见表6）由表6可知，添加7%发酵构树粉可显著增加胸肌中C14∶0和C15∶1的含量（P0.05），显著减少胸肌中C18∶0的含量（P0.05），有减少胸肌中C17∶1含量的趋势（P=0.088 8）。添加7%发酵构树粉有腿肌中C18∶2含量的趋势（P=0.076 5）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T006表6添加发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌肌肉脂肪酸组分的影响项目胸肌腿肌对照组试验组P值对照组试验组P值肉蔻酸（C14∶0）0.10±0.00a0.18±0.03b0.024 00.28±0.060.20±0.040.350 6十五碳烯酸甲酯（C15∶1）4.20±2.30b11.18±0.96a0.019 18.83±2.1610.57±1.150.495 3棕榈酸（C16∶0）17.72±2.3415.08±1.100.331 526.50±3.4018.90±1.680.654 2棕榈油酸（C16∶1）1.42±0.251.26±0.300.698 32.87±0.802.77±0.350.911 0十七碳烯酸甲酯（C17∶1）3.03±0.621.67±0.370.088 83.52±0.784.08±0.600.595 0硬脂酸（C18∶0）8.03±1.02a4.10±0.49b0.004 312.67±1.0211.03±0.590.194 5续表6　添加发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌肌肉脂肪酸组分的影响 单位：mg/100 gmg/100 g10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.01.011.T007项目胸肌腿肌对照组试验组P值对照组试验组P值油酸［C18∶1，cis（n9）］5.98±0.626.43±0.340.537 511.35±1.209.77±0.630.270 2亚油酸［C18∶2，cis（n6）］8.73±1.047.45±0.460.286 517.22±1.7513.27±0.960.076 5花生四烯酸（C20∶4 n6）3.12±0.423.28±0.530.811 28.10±0.906.67±0.570.207 0饱和脂肪酸（SFA）26.07±3.3219.25±1.150.081 233.50±4.4030.10±2.200.504 9不饱和脂肪酸（UFA）26.48±4.1931.07±1.570.330 151.88±6.9946.43±4.020.514 63讨论3.1发酵构树粉对宁都三黄鸡胸、腿肌发育的影响张兴等[15]研究发现，湘沙猪配套系商品猪饲养前期和后期分别添加20%和30%的构树发酵饲料对生长性能无显著影响。研究表明，基础饲粮中添加1.5%~2.0%发酵构树粉显著提高海兰灰蛋鸡的生产性能[16]。饲粮添加适量发酵构树叶对AA肉仔鸡无不良影响[10]。本研究中，宁都三黄鸡基础日粮中添加7%发酵构树粉，三黄鸡末重、胸肌重、腿肌重、胸肌率和腿肌率均无显著变化，表明添加适量的发酵构树粉替代基础日粮对三黄鸡生长性能无负面影响。3.2发酵构树粉对宁都三黄鸡肉品质的影响在育肥猪饲粮中添加构树叶可以影响猪肉的嫩度，改变肉色[17-19]。在饲粮中加入发酵构树叶不会影响AA肉仔鸡的生长性能，但可提高肌肉的系水力、pH值，减少肌肉的滴水损失率和烹饪损失率[8]。但本研究发现，日粮中添加7%发酵构树粉对胸肌肌肉pH值、滴水损失率和剪切力无显著影响，可在一定程度上提高腿肌滴水损失率（P=0.091 6），与宋博等[19]在育肥猪饲粮中添加10%的构树叶可显著增加猪肉的失水率结果一致。原因可能是全株构树干粉中粗纤维含量较高，单胃动物难以消化，对肉品质造成不利的影响。因此，建议宁都三黄鸡日粮中发酵构树粉的添加量不高于7%。在构树叶中，丰富的脂肪酸类[20]、脂类及氨基酸类[21]等物质可引起畜禽肌肉内氨基酸、脂肪酸等含量的变化。在低蛋白质饲粮中添加10%构树全株发酵饲料对育肥猪的生长性能无负面影响，但可降低血清尿素氮含量及背膘厚度，可增加背最长肌中游离氨基酸和脂肪含量，从而改善肉的风味和营养价值[19]。在饲粮中加入发酵构树叶，可增加肉鸡肌肉肌苷酸（IMP）、肌苷（HxR）含量，改善鸡肉风味[8]。添加青贮杂交构树可显著改变杜湖杂交肉羊背最长肌氨基酸和脂肪酸的含量，提高羊肉品质[22]。本研究发现，添加7%发酵构树粉可显著提高胸肌风味形成相关的Gly和Cys含量，降低肌肉嫩度相关的Pro含量；添加7%发酵构树粉显著影响胸肌中脂肪酸（C14∶0、C15∶1、C17∶1和C18∶0）含量。4结论在宁都三黄鸡日粮中添加7%的发酵构树粉可通过影响氨基酸、脂肪酸含量改变鸡肉品质。宁都三黄鸡日粮中发酵构树粉的添加量最好不高于7%。