蛋白质类饲料原料的缺乏成为畜禽养殖生产健康可持续发展的主要因素。非常规蛋白质饲料原料能够改善蛋白质饲料资源缺乏的现状[1]。棉籽粕、葵花粕、亚麻粕等非常规饲料原料可缓解饲料对畜禽发展的制约[2]。中国是亚麻籽生产及进口大国[3]，亚麻籽经榨油后成为含蛋白质32%~49%的亚麻籽饼粕[4]，但是因其含有生氰糖苷、植酸及胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子，推广和利用受到限制。通过微生物发酵亚麻籽饼粕可以替代蛋白质饲料原料。常寨成等[5]研究表明，可通过微生物发酵法去除油料饼粕中的抗营养因子。降低生氰糖苷等抗营养因子的影响，可以提高畜禽生产性能及营养物质消化率。但是，目前发酵亚麻籽饼在肉鸡上的饲用效果报道较少。本试验使用发酵亚麻籽饼替代日粮中的豆粕，研究发酵亚麻籽饼对肉鸡生长性能、血清抗氧化功能、免疫功能及肠道形态的影响，为发酵亚麻籽饼在畜禽生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料发酵亚麻籽饼由国家粮食局科学研究院中试基地研制。发酵亚麻籽饼主要营养成分包括：生氰糖苷32.96 mg/kg、粗蛋白质含量38.90%、粗纤维含量12.84%、粗脂肪含量10.15%。1.2试验设计和日粮本试验按照完全随机设计，将180只1日龄健康爱拔益嘉肉鸡（46.37±1.09）g，随机分为3组，每组6个重复，每个重复10只肉鸡。对照组（CON组）饲喂玉米-豆粕型日粮，试验组分别在基础日粮中添加5%未发酵亚麻籽饼（FSC组）、5%发酵亚麻籽饼（SFFSC组）。日粮营养成分参考NRC（1994）及中国肉鸡饲养标准（2004）配制。试验日粮组成及营养水平表见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T001表1试验日粮组成及营养水平项目1~21 d22~42 d对照组FSC组SFFSC组对照组FSC组SFFSC组原料组成/%玉米57.3655.0255.0259.5657.2457.24豆粕35.2632.0432.0432.2629.2829.28亚麻籽饼0.005.000.000.005.000.00发酵亚麻籽饼0.000.005.000.000.005.00豆油3.003.483.484.054.354.35磷酸氢钙1.461.461.461.321.221.22石粉1.151.151.151.151.151.15食盐0.280.280.280.280.280.28L-赖氨酸（98%）0.020.120.120.020.120.12蛋氨酸（98%）0.220.200.200.110.110.11三氧化二铬0.250.250.250.250.250.25预混料1.001.001.001.001.001.00合计100.00100.00100.00100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.5212.5212.5212.9412.9412.94粗蛋白/%21.4821.4821.4820.0020.0020.00钙/%0.960.950.950.900.900.90总磷/%0.700.710.710.650.660.66可消化磷/%0.460.460.460.430.430.43赖氨酸/%1.371.371.371.141.141.14蛋氨酸/%0.540.540.540.410.410.41注：1.预混料为每千克日粮提供：锌60 mg、铁100 mg、锰80 mg、铜10 mg、碘0.35 mg、硒0.3 mg、VA 10 000 IU、VD3 2 850 IU、VE 30 IU、VK3 2 mg、VB12 1.2 mg、核黄素6 mg、烟酸40 mg、泛酸 12 mg、吡哆醇3 mg、生物素0.2 mg、氯化胆碱800 mg。2.营养水平中粗蛋白和钙含量为实测值，其余均为计算值。1.3饲养管理试验在温氏食品集团股份有限公司肉鸡场进行。试验采用全封闭式鸡舍、自动化设备控制舍内温度、湿度及通风强度，舍内起始温度34 ℃，每周降低2~3 ℃，直至降至24 ℃，24 h光照，自由采食、饮水，试验肉鸡饲养及舍内卫生管理均按照常规饲养规程进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能在试验第1、21、42 d时，分别对肉鸡个体及饲料称重，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。平均日增重：试验开始和试验结束时，以笼为单位称重，计算平均日增重。平均日采食量：试验开始和试验结束时，以笼为单位结料，计算平均日采食量。料重比：平均日采食量与平均日增重之比。1.4.2营养物质表观消化率试验期第19~21 d、40~42 d，每天分别采集每个重复的鸡排泄物，将排泄物按重复混合均匀，收集100 g于粪盒内，65 ℃烘干72 h，将干燥粪样40目粉碎。测定料样和粪样干物质（GB/T 6435—2006）、粗蛋白（GB/T 6432—1994）、粗灰分（GB/T 6438—2007）的含量。总能使用氧氮式热量计（6400型，美国Parr公司）测定，铬含量使用原子吸收光谱仪（日立Z-5000，日本）测定。根据指示剂法计算各营养成分表观消化率。1.4.3器官指数肉鸡饲养至21 d和42 d，禁食12 h屠宰，每个重复中随机选择1只肉鸡，称活重，颈动脉采血致死，湿法褪毛，测定第21 d和42 d肉鸡器官指数。内脏器官指数(%)=内脏器官鲜重(g)/屠宰前体重(g)×100%(1)1.4.4血清抗氧化、免疫指标试验第21 d和42 d，挑选每个重复接近平均体重的肉鸡1只，采血10 mL，室温静置1 h，3 000 r/min离心15 min，取上清。血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）含量采用全自动生化分析仪（日立7600）测定。血清总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和总抗氧化能力（T-AOC）均采用试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定。1.4.5肠道形态试验第42 d，每个重复随机选取接近平均体重的2只肉鸡，屠宰，使用10%中性福尔马林缓冲液贮存十二指肠、空肠及回肠片段。采用酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切成4 μm切片，HE染色（苏木精染核和伊红染胞质），在每个部位组织切片上选取6个绒毛完整且走向平直视野，采用真彩图像分析软件采集图像并分析肠道形态。1.5数据统计与分析采用SAS GLM模型进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较，结果以平均值和标准误表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵亚麻籽饼对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验前期（1~21 d），SFFSC组及对照组肉鸡ADG显著高于FSC组（P0.05），SFFSC组肉鸡ADFI显著高于FSC组（P0.05）。试验后期（22~42 d），FSC组肉鸡ADG显著低于对照组（P0.05）。试验全期（1~42 d），FSC组的F/G显著高于对照组和SFFSC组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T002表2发酵亚麻籽饼对肉鸡生长性能的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值初重/g46.3046.4246.200.040.1421 d体重/g903.52b827.62c907.62a0.690.0142 d体重/g2 985.25a2 762.98c2 919.63b5.000.02试验前期（1~21 d）ADG/[g/(只·d)]40.82a37.20b41.02a0.510.04ADFI/[g/(只·d)]54.97ab51.80b55.15a1.300.02F/G1.351.391.340.030.79试验后期（22~42 d）ADG/[g/(只·d)]99.13a92.16b95.81ab1.120.03ADFI/[g/(只·d)]158.15152.23156.411.390.58F/G1.601.651.630.040.60试验全期（1~42 d）ADG/[g/(只·d)]69.9864.6868.420.470.12ADFI/[g/(只·d)]106.56102.02105.781.050.51F/G1.52b1.58a1.55b0.030.04注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2发酵亚麻籽饼对肉鸡营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，试验前期（1~21 d），对照组及SFFSC组粗蛋白质消化率显著高于FSC组（P0.05）；试验后期（22~42 d），FSC组粗蛋白质消化率显著低于SFFSC组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T003表3发酵亚麻籽饼对肉鸡营养物质表观消化率的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值试验前期（1~21 d）干物质81.6481.4881.861.720.19有机物84.9384.7185.861.480.28粗蛋白质85.39a82.31b86.9a1.370.04总能82.9883.0283.371.960.35试验后期（22~42 d）干物质80.6881.7982.011.200.77有机物83.5084.2284.481.750.76粗蛋白质64.74ab63.44b66.60a2.940.01总能82.4083.6283.681.100.79%2.3发酵亚麻籽饼对肉鸡器官指数的影响（见表4）由表4可知，试验前期（1~21 d），FSC组法氏囊指数显著低于对照组（P0.05）。试验后期（22~42 d），FSC组脾脏指数显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T004表4发酵亚麻籽饼对肉鸡器官指数的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值试验前期（1~21 d）心脏指数0.530.720.640.270.11肝脏指数28.3228.2430.982.080.30脾脏指数0.860.780.840.170.14胰脏指数1.721.741.980.080.17法氏囊指数0.52a0.43b0.49ab0.050.03试验后期（22~42 d）心脏指数4.884.905.060.260. 67肝脏指数19.8920.8818.942.180.41脾脏指数1.54a1.33b1.46ab0.270.04胰脏指数1.731.681.720.130.18%2.4发酵亚麻籽饼对肉鸡血清抗氧化功能的影响（见表5）由表5可知，试验前期（1~21 d），各处理组肉鸡血清抗氧化功能无显著差异（P0.05）。试验后期（22~42 d），SFFSC组肉鸡血清T-AOC水平显著高于对照组及FSC组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T005表5发酵亚麻籽饼对肉鸡抗氧化功能的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值试验前期（1~21 d）SOD/(U/mL)116.51114.48116.981.170.39T-AOC/(U/mL)3.453.513.250.920.25MDA/(μmol/L)5.515.635.540.160.82试验后期（22~42 d）SOD/(U/mL)115.98116.12118.080.760.36T-AOC/(U/mL)7.69b8.45ab9.18a0.240.01MDA/(μmol/L)4.654.764.400. 340.222.5发酵亚麻籽饼对肉鸡血清免疫球蛋白水平的影响（见表6）由表6可知，试验前期（1~21 d），肉鸡日粮中添加SFFSC能够显著提高IgA的水平（P0.05），但对IgG和IgM的水平无显著差异（P0.05）。试验后期（22~42 d），各处理组间无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T006表6发酵亚麻籽饼对肉鸡免疫球蛋白的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值试验前期（1~21 d）IgA54.39b54.16b59.19a0.880.01IgM16.5114.4816.981.150.29IgG24.4524.5123.250.920.05试验后期（22~42 d）IgA61.6163.4962.281.1590.54IgM15.9816.1218.080.7860.16IgG24.0825.9122.661.2710.28g/L2.6发酵亚麻籽饼对肉鸡肠道形态的影响（见表7）由表7可知，FSC组十二指肠绒毛高度显著低于对照组（P0.05），隐窝深度显著高于对照组及SFFSC组（P0.05），绒毛高度及隐窝深度的比值显著低于对照组（P0.05），但空肠及回肠肠道形态各处理间无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.011.T007表7发酵亚麻籽饼对肉鸡肠道形态的影响项目对照组FSC组SFFSC组SEMP值十二指肠绒毛高度/μm1 469.00a1 119.00b1 322.00ab110.430.04隐窝深度/μm156.00b189a169.00b8.020.01绒毛/隐窝9.42a5.92b7.82ab0.720.03空肠绒毛高度/μm1 353.001 089.001 316.00145.620.17隐窝深度/μm178.00174.00180.009.540.74绒毛/隐窝8.165.267.871.120.22回肠绒毛高度/μm1 194.00974.001 032.0069.620.13隐窝深度/μm116.00117.00114.006.540.52绒毛/隐窝10.298.329.050.640.143讨论3.1发酵亚麻籽饼对肉鸡生长性能的影响亚麻籽饼中含有生氰糖苷、抗VB6、植酸等抗营养因子，限制亚麻籽饼在畜禽生产中的应用[6]。Anjum等[7]研究表明，肉鸡日粮中添加5%未发酵亚麻籽饼（FSC）能够显著降低肉鸡生长性能。本试验中，SFFSC组肉鸡的ADG和ADFI高于FSC组，FSC组料重比低于SFFSC组及对照组。日粮中添加FSC降低肉鸡生长性能，原因可能是FSC中含有抗营养因子生氰糖苷，降低营养物质的吸收利用和适口性。FSC中的可溶性非淀粉多糖具有一定的营养屏障作用[8]。SFFSC组能够改善肉鸡生长性能，原因是发酵处理后的FSC中生氰糖苷的含量降低，从而提高日粮的适口性；发酵后的饲料原料中的大分子分解为利于消化吸收的小分子，增加多肽及有益物质的释放，使畜禽充分吸收利用营养物质，不同程度地改善畜禽生长性能[9-10]。3.2发酵亚麻籽饼对肉鸡营养物质表观消化率的影响微生物发酵处理后的菜籽粕、棉粕等杂粕的粗蛋白质含量会有一定程度的提高[11]。本试验结果表明，试验前期，对照组及SFFSC组粗蛋白质表观消化率显著高于FSC组；试验后期，FSC组粗蛋白质表观消化率显著低于SFFSC组。SFFSC能够促进肉鸡对FSC中蛋白质的吸收，原因可能是发酵FSC能够降解生氰糖苷及非可溶性淀粉多糖，多肽含量增加，进而促进蛋白质的消化吸收和利用[12]。3.3发酵亚麻籽饼对肉鸡器官指数的影响肉鸡的脾脏、胰脏及法氏囊可以产生抗体，是机体免疫细胞形成的主要器官，免疫器官指数能够直接反映畜禽的免疫水平[13]。Rivas等[14]研究表明，肉鸡法氏囊和脾脏相对机体的重量越大，免疫功能越强。本试验结果表明，SFFSC组能够提高法氏囊及脾脏指数，发酵亚麻籽饼（SFFSC）能够刺激肉鸡免疫应答反应，原因是SFFSC中的小肽能够促进免疫器官的发育。3.4发酵亚麻籽饼对肉鸡血清抗氧化功能的影响血清SOD活性、T-AOC及MDA含量能够直观反映机体抗氧化状态，能够在非酶系统中调节氧化平衡状态[15]。本试验结果表明，试验后期，肉鸡日粮中添加SFFSC能够提高T-AOC，减少氧自由基的产生及脂质过氧化反应的发生，缓减应激导致氧化损伤，促进畜禽生长。由于SFFSC通过增加机体抗氧化肽含量，进而提高抗氧化能力[12]。SFFSC的抗氧化功能可通过微生物发酵过程中产生的乳酸及抗氧化性维生素等发挥作用[16]。3.5发酵亚麻籽饼对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响免疫球蛋白可反映机体的免疫状态[17]。本研究结果表明，肉鸡日粮中添加SFFSC能够显著提高IgA含量。微生物发酵产生乳酸、益生菌等物质[18]，且分泌部分蛋白酶，促进消化道中有益菌数量增加及肠道菌群平衡，提高免疫和及采食量。发酵使日粮中的粗蛋白质含量升高，产生具有特殊营养价值的多肽，可提高营养物质的利用效率和动物的免疫水平[19]。3.6发酵亚麻籽饼对肉鸡肠道形态的影响单胃动物小肠的结构完整及功能正常是畜禽充分消化吸收营养物质的前提[20]，而小肠的绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度是衡量肠道功能的重要指标[21]。本试验结果表明，FSC组肉鸡十二指肠绒毛高度显著低于对照组，隐窝深度显著高于对照组及SFFSC组，绒毛高度及隐窝深度的比值显著低于对照组。原因可能是饲料原料中的抗营养因子能够导致肉鸡肠道产生不良反应，进而影响绒毛和隐窝的正常生长，降低营养物质的吸收。SFFSC组肉鸡绒毛高度以及隐窝深度与对照组无显著差异，可能是因为发酵后的FSC中含有较多益生菌数量及肽，促进肠道的正常发育及结构完整[21]。Chichlowski等[22]、王恬等[23]研究发现，分别在猪日粮中添加肽或在鸡日粮中直接饲喂饲用微生物均能够显著改善猪、鸡肠道形态。4结论使用发酵亚麻籽饼替代豆粕可通过改善肉鸡肠道形态，提高营养物质表观消化率，增强机体抗氧化和免疫功能，进而改善肉鸡的生长性能。