随着工业和技术的发展,马的役用和运输价值被现代交通工具取代,但我国对马的饲养管理研究存在欠缺,关于马的营养需求尚无统一标准[1]。赛马作为地方旅游的传统项目,能够为提升地方经济做出重要贡献。我国部分地区引入现代赛马规则并打造现代赛马场地,旨在丰富人民的文娱生活[2]。因此,马的营养研究对推动马产业的发展具有重要作用。本文通过给焉耆马饲喂不同能蛋比日粮,探讨不同能蛋比对焉耆马运动性能的影响,采集焉耆马血液检测其生化指标及抗氧化指标,并分析作用机理,为马的日粮配制提供参考。1材料与方法1.1试验动物焉耆马由巴音郭楞蒙古自治州宝奇焉耆马种马场提供。1.2试验设计选取平均年龄7岁、平均体重350 kg焉耆马36匹,随机分为3组,每组12匹。A组(对照组)焉耆马饲喂基础日粮,基础日粮配方根据李海英等[3]的研究,基础日粮的能蛋比(每千克饲料消化能与粗蛋白的比值,kJ/kg∶g/kg)为86.79,在基础日粮粗蛋白含量不变的前提下,通过添加椰油粉将赛马日粮的能蛋比分别提高至90.79、94.79(分别为B组、C组)。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.013.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米45.00总能/(MJ/kg)12.15小麦麸25.00粗蛋白/%14.00次粉15.00中性洗涤纤维/%22.70豆粕(43%)10.00酸性洗涤纤维/%7.10磷酸氢钙2.20钙/%0.63食盐1.80磷/%0.94预混合饲料1.00注:1.预混合饲料购自北京泽牧久远生物科技研究院。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理根据马的生理特性和生活习惯,分别在7:30、11:30、16:30、21:00和23:00等5个时间段进行饲喂。试验0~30 d,每间隔1 d进行10 kg训练;试验31~60 d,每间隔1 d进行20 kg训练(雨天除外);试验61~90 d,每间隔3 d进行30 kg训练。训练期间,在训练结束2 h对赛马进行饲喂,训练结束1 h允许饮水。1.4模拟比赛与样品采集饲喂试验结束第2 d,进行模拟比赛。赛前各组焉耆马进行1.5 km热身运动、50 km耐力赛并统计完成时间。模拟比赛结束后,每组随机选择6匹马,采用颈静脉采血收集马匹血样(肝素钠抗凝管1管,氟化钠-草酸钾抗凝管1管,无抗凝处理1管,每管5 mL),3 000 r/min离心15 min,获得血浆和血清,-20 ℃冷冻保存。1.5测定指标及方法1.5.1运动性能运动性能:赛马的平均速度、心率、赛后体温。采用测搏仪在比赛结束后5 min、30 min时段测定马的心率,采用温度计测定赛后5 min马的直肠温度,采用听诊器测定赛后5 min的呼吸频率。赛马的平均速度=50 km/完成时间(1)1.5.2血清抗氧化指标采用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC);采用可见光法测定过氧化氢酶(CAT)活性;采用分光光度法测定丙二醛(MDA)含量[4]。1.5.3血浆生化指标采用电化学发光法[5]检测睾酮(T)、尿素氮(BUN)含量;采用氰化正铁血红蛋白比色法[6]测定血红蛋白(HGB)含量;采用高效液相色谱法[7]测定乳酸(LA)含量;采用分光光度比色法检测[8]肌酸磷酸激酶(CK)活性;采用己糖激酶法测定葡萄糖(GLU)。1.6数据统计与分析数据采用SAS 9.0统计学软件进行单因素方差分析,Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示,P0.05表示差异显著,P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1不同能蛋比对焉耆马运动性能的影响(见表2)由表2可知,随着能蛋比的提高,B组和C组赛马50 km竞赛的速度显著高于A组(P0.05),但B组、C组间差异不显著(P0.05)。比赛结束后5 min内,B组和C组赛马心率均极显著低于A组(P0.01);赛后6 min内,B组和C组赛马的呼吸频率极显著低于A组(P0.01),但B组、C组间差异不显著(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.013.T002表2不同能蛋比对焉耆马运动性能的影响组别平均速度/(km/h)赛后5 min心率/(次/min)赛后30 min心率/(次/min)赛后5 min直肠温度/℃赛后6 min呼吸频率/(次/min)A组16.42±0.89b118.50±4.36A61.34±5.3440.12±0.09112.38±4.89AB组17.28±0.91a108.30±3.63B58.29±4.1340.18±0.1198.43±3.25BC组17.53±1.12a100.17±3.22C60.48±8.3440.20±0.1390.67±4.34B注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),不同大写字母表示差异极显著(P0.01),相同字母或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.2不同能蛋比对焉耆马抗氧化指标的影响(见表3)由表3可知,C组赛马血清SOD活性显著高于A组(P0.05);B组、C组赛马血清的GSH-Px活性和T-AOC均显著高于A组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.013.T003表3不同能蛋比对焉耆马抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(U/mL)MDA/(μmol/L)A组4.35±1.23b414.58±29.34b7.89±0.984.08±0.56b2.25±0.12B组4.82±0.89ab463.87±15.97a8.23±1.015.17±0.73a2.39±0.28C组4.95±0.62a471.29±33.47a6.78±0.845.26±1.05a2.46±0.132.3不同能蛋比对焉耆马血浆生化指标的影响(见表4)由表4可知,C组赛马血浆的GLU含量显著低于A组(P0.05);B组、C组赛马血清的BUN含显著低于A组(P0.05);能蛋比对CK活性无显著影响(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.02.013.T004表4不同能蛋比对焉耆马血浆生化指标的影响组别T/(nmol/L)LA/(mmol/L)HGB/(g/L)GLU/(mmol/L)BUN/(mol/L)CK/(U/L)A组26.38±2.576.02±0.59135.63±7.105.59±0.38a6.69±0.25a185.43±11.50B组27.80±4.775.78±0.98138.49±12.885.45±0.43ab6.38±0.19b196.89±15.77C组26.99±5.515.73±0.47132.88±7.355.30±0.31b6.40±0.42b189.34±13.783讨论3.1不同能蛋比对焉耆马运动性能的影响分析不同品种和条件下赛马的营养需求可以保证赛马的健康生长,提高赛马的运动性能[9]。Nolazco等[10]认为,赛马在剧烈运动前后,血浆中脂类成分组成会产生较大的变化,说明脂类物质在剧烈运动中也可能参与能量供应,因此,需要重视脂类物质在赛马饲养中的应用。但Müller等[11]研究发现,采用谷物为主要能量饲料提高赛马日粮的能蛋比,可能会造成赛马消化不良、肠绞痛等,但通过油脂类饲料提高赛马日粮的能蛋比可以有效解决该类问题。本研究结果表明,提高赛马日粮的能蛋比可以提高马的运动性能。原因可能是在长时间剧烈运动下,马体内能量来源会由糖类物质逐步转为脂类物质,长时间剧烈运动体内功能方式以有氧代谢和无氧代谢并存[12]。因此,赛马体内脂肪贮存较高,使焉耆马在50 km竞赛中能量供应更为充足,进而提高赛马的运动性能,脂类物质能值更高,代谢导致马直肠的温度相对较高。3.2不同能蛋比对焉耆马血清抗氧化指标的影响SOD、GSH-Px、CAT和T-AOC等均为评价动物机体内清除自由基、提高抗氧化能力的重要指标。MDA是脂类物质氧化作用的终产物,MDA含量可以反映氧化程度,也可以直接表明机体细胞膜的损伤程度和自由基浓度[13]。李瑞等[14]对椰子油(VCO)体外抗氧化活性进行了评价,结果表明,VCO中总酚酸的含量为0.180 g/L,对DPPH自由基的清除率为31.95%。椰子油是椰油粉的重要成分,说明椰油粉可能提高动物抗氧化性能。陈雪君[15]研究发现,日粮中添加豆油或玉米油可提高羊血清和肝脏中抗氧化酶活性,降低过氧化产物MDA含量。张红娟等[16]研究发现,大菱鲆饵料中脂肪水平越高,大菱鲆肝脏中SOD活性越高。张春暖等[17]研究认为,随着日粮脂肪水平的提高,梭鱼抗氧化能力呈先升后降的趋势。因此,适当提高动物日粮中的脂类物质含量可以提高动物的抗氧化能力。本研究结果表明,粗蛋白水平不变的条件下,提高能量浓度可以使SOD和GSH-Px活性上升,进而提高赛马机体的抗氧化能力。3.3不同能蛋比对焉耆马血浆生化指标的影响T能够促进红细胞生成,提高糖原储备,并且与运动后肌糖原的恢复和消除疲劳存在重要关联,对提高机体的力量和速度有重要作用[18-19]。因此,T含量可以一定程度上反映赛马的运动能力。HGB是动物体内氧的运转工具,其含量可以反映机体携氧能力,进而影响动物的有氧运动能力和运动恢复能力[20]。LA是糖在体内无氧酵解的产物,大量LA聚集可能造成肌肉疲劳、疼痛甚至不可逆损伤。CK广泛分布于骨骼肌和心肌等肌肉组织中的酶,多发性肌炎、肌肉损伤、肌肉萎缩症等均可引起CK活性升高。本研究中,不同能蛋比对焉耆马T、HGB、LA含量和CK活性均无显著影响,表明能蛋比并不是通过调节该类物质提高赛马的运动性能。剧烈运动时机体可能通过分解蛋白质产生BUN,血液中BUN含量间接表明运动强度和负荷量,也可以反映机体运动损伤程度[21]。本研究中,随着能蛋比的提高,BUN含量显著降低,说明焉耆马补充脂类物质可以有效替代蛋白质分解功能,也可以降低机体剧烈运动后的劳损。糖是动物体内的主要供能物质,本研究中,焉耆马赛后的GLU含量随能蛋比提高而降低,可能是因为脂类物质在竞赛中功能明显,降低了机体内部糖原的分解速度。4结论本研究表明,提高赛马日粮中的能蛋比能够提高其运动性能,但需要保持一定范围;在赛马日粮中添加适当的脂类物质可以提高机体抗氧化能力,防止肌肉损伤,缓解肌肉疲劳。
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