嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T cells， CAR-T）免疫疗法在血液系统肿瘤治疗中疗效显著，但其脱靶效应、细胞因子风暴等不良反应严重限制其临床应用［1–4］。On-switch CAR-T系统［5–6］的研发为解决该问题提供了思路。雷帕霉素（rapamycin，RAPA）作为该系统中的一种调控小分子，可介导CAR基因组装并激活T细胞杀伤功能，却因全身性分布难以在卵巢癌肿瘤部位有效富集，无法实现CAR-T细胞的局部特异性激活，脱靶问题仍未解决［7］。脂质纳米盘兼具稳定性高、生物相容性良好的特点，独特的盘状形态与小尺寸使其能够有效穿透致密肿瘤基质，实现药物向肿瘤深部的递送［8–9］；光响应技术则可实现药物的时空精准释放［10–12］，二者结合为改善RAPA的肿瘤递送效率提供了新方向。该研究构建负载RAPA的光敏纳米盘，通过近红外光触发实现药物时空调控释放，系统表征其理化性质与光控释药性能，明确其细胞摄取机制及体外抗卵巢癌活性，旨在为RAPA局部调控On-switch CAR-T治疗卵巢癌提供新型纳米载药系统，为后续卵巢癌免疫联合纳米治疗的研究奠定实验基础。1材料与方法1.1主要试剂2-油酰-1-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（2-oleoyl-1-palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，POPC）（货号：O824213）、胆固醇（cholesterol，CHOL）（99%生物技术级，货号：C6213）和1，2-二亚油酰基-3-sn-磷脂酰胆碱（1，2-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DLPC）（货号：L875640）购自上海麦克林生化科技股份有限公司；二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2 000 ［1，2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-（methoxy（p6olyethylene glycol）-2 000），DSPE-PEG2 000］（货号：F01008）购自艾伟拓（上海）医药科技有限公司；1，4，8，11，15，18，22，25-八丁氧基酞菁钯［1，4，8，11，15，18，22，25-octabutoxypalladium phthalocyanine，PdPC（OBu）8］（货号：R-TJ-004）购自西安瑞禧生物科技有限公司；香豆素6（coumarin 6，C6）（含量98%，货号：442631）购自美国Sigma-Aldrich公司；RAPA（含量99.94%，货号：HY-10219）和盐酸阿米洛利（含量99.96%，货号：HY-B0285）购自美国MedChemExpress公司；RPMI 1640培养基（货号：L210KJ）和DMEM培养基（货号：L110KJ）购自上海源培生物科技股份有限公司；胎牛血清（货号：A5669701）购自美国Thermo Fisher Scientific公司；细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）（货号：C0038）和二氢乙锭（dihydroethidium，DHE）超氧阴离子检测试剂盒（货号：S0064S）购自上海碧云天生物技术有限公司；非律平（含量97.0%，货号：MB1848）、渥曼青霉素（含量98.0%，货号：MB5799）和金雀异黄酮（含量98.0%，货号：MB2170）购自大连美仑生物技术有限公司；盐酸氯丙嗪（含量95.0%，货号：C184839）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。1.2主要仪器高效液相色谱-质谱仪（美国安捷伦公司，型号：110系列）；紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司，型号：UV1102）； 荧光分光光度计（日本HITACHA公司，型号：F-7000）；酶标仪（美国Thermo Scientific公司，型号：Multiscan MK3）；激光共聚焦显微镜（德国Leica公司，型号：TCS SP5）；流式细胞仪（美国Beckman Coulter Life Sciences公司，型号：CytoFLEX LX）；730 nm光纤激光器（吉林省一博商贸有限公司，型号：ADR-1805）。1.3细胞培养人卵巢癌细胞系OVCAR-8购自广州博辉生物科技有限公司，使用RPMI 1640培养基进行培养，该培养基中添加了10%胎牛血清、50 U/mL青霉素及50 U/mL链霉素。细胞置于37 ℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中常规培养。待细胞生长至70% ~ 80%融合度时，采用胰蛋白酶消化并传代。1.4RAPA纳米盘的制备采用薄膜水化法制备负载RAPA的纳米盘。纳米盘配方见表1。精确称取处方量的POPC、胆固醇、DSPE-PEG2 000、DLPC、PdPC（OBu）8及RAPA，溶于适量乙醇或氯仿，超声处理至完全溶解。随后经减压蒸发去除有机溶剂，形成脂质薄膜，并真空干燥过夜以降低残留氯仿。加入预热的PBS缓冲液，水化30 min。水化后在冰浴条件下使用超声破碎仪进行超声处理：50 W 5 min，100 W 2 min。最后经0.22 μm水系滤膜过滤，即得负载RAPA的纳米盘。空白纳米盘与负载C6的纳米盘按同法制备，C6用量与RAPA一样。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.T001表1纳米盘配方Tab.1Composition of nanodiscsComponentMolar ratioPOPC30CHOL40DSPE-PEG2 00025DLPC5PdPC（OBu）8a0.005∶1bRAPAa0.005∶1ba： Drug-to-lipid molar ratio； b： Indicates the molar ratio of drug to total lipids.1.5纳米盘的表征取少量制得的纳米盘，用去离子水稀释50倍，使用马尔文激光粒度仪测定其粒径与Zeta电位。将纳米盘置于4 ℃贮藏，分别于第0、1、3、5、7天考察其粒径和电位变化。另通过透射电子显微镜观察纳米盘的形貌与粒径。1.6RAPA检测方法的建立1.6.1色谱条件Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱［（4.6 × 150） mm，5 μm］；流动相甲醇∶纯水（84∶16， V/V），等度洗脱；柱温50 ℃；检测波长278 nm；流速1.0 mL/min；进样量20 μL。1.6.2溶液配制对照品溶液：精密称量适量RAPA，置于容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容，10 000 r/min离心10 min。取上清液，经0.45 μm有机系滤膜过滤，即得对照品溶液。供试品溶液：精密吸取制备的RAPA纳米盘溶液500 μL，置于5 mL容量瓶中，甲醇定容。超声10 min破乳，再于10 000 r/min离心10 min，取上清液经0.45 μm有机系滤膜，即得供试品溶液。空白纳米盘破乳溶液：精密吸取制备的空白纳米盘溶液500 μL，置于5 mL容量瓶中，甲醇定容。同法进行超声破乳、离心及过滤处理，即得空白纳米盘破乳溶液。1.6.3专属性实验取“1.6.2”项下对照品溶液、供试品溶液及空白纳米盘破乳溶液，经0.22 μm有机系滤膜过滤，取续滤液，按“1.6.1”项下色谱条件进样分析。1.6.4线性关系考察精密称取RAPA 5.00 mg，置于50 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，制得100 μg/mL储备液。精密吸取储备液并加入甲醇稀释制成浓度为40、20、10、5、2、1、0.5、0.2 μg/mL的系列溶液，经0.22 μm有机系滤膜过滤，取续滤液作为系列浓度的对照品溶液。按“1.6.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱峰面积A，以峰面积A对浓度C进行线性回归，绘制标准曲线。1.6.5精密度实验采用低、中、高3个浓度（0.5、2、10 μg/mL）的对照品溶液进行精密度考察。日内精密度：于1日内对各浓度分别平行测定3次；日间精密度：连续3日，每日测定1次。1.6.6重复性实验取同一批纳米盘溶液50 μL，共6份，按“1.6.2”项下方法制备供试品溶液，并按“1.6.1”项下色谱条件进样测定。1.6.7稳定性实验取对照品溶液，于室温条件下分别于0、6、12、18、24 h进样测定，记录各时间点对照品溶液浓度，评估溶液稳定性。1.6.8加样回收率实验精密吸取用于配制低、中、高3个浓度（0.5、2、10 μg/mL）对照品的储备液，分别置5 mL容量瓶中，每1个浓度配制3份。各加入50 μL空白纳米盘溶液，甲醇定容，超声10 min破乳，10 000 r/min离心10 min。取上清液经0.22 μm有机系滤膜过滤后进样测定，计算加样回收率。1.7纳米盘溶液中单线态氧的检测采用单线态氧（singlet oxygen，¹O₂）检测探针1，3-二苯基异苯并呋喃（1，3-diphenylisobenzofuran，DPBF）评估纳米盘在近红外光照下的¹O₂生成能力。将纳米盘溶液稀释至适宜浓度后，加入100 μL DPBF溶液（0.3 mg/mL），使用荧光分光光度计在激发波长403 nm、扫描速度240 nm/min、电压700 V、狭缝宽度10 nm及响应时间0.1 s的参数下，扫描并记录425 ~ 630 nm范围内的发射光谱作为光照前¹O₂生成的对照。随后，以730 nm近红外光在300 mW/cm²的辐照强度下照射溶液1 min，立即于相同条件下扫描记录425 ~ 630 nm的荧光值。通过比较光照前后光谱变化，评估¹O₂生成情况。1.8纳米盘光敏响应释放采用反向透析法考察RAPA纳米盘的光敏释放特性。以30 mL 20%乙醇溶液为释放介质，置于50 mL离心管中。取200 μL纳米盘置于1.5 mL离心管内，加入1 mL释放介质，经730 nm近红外光（300 mW/cm2）照射5 min后，转移至透析袋内，两端扎紧后放入离心管中。将离心管置于37 ℃摇床中进行振荡（180 r/min）。分别于1、2、4、8、12 h从透析袋内取样200 μL，用于药物含量测定及累积释放率计算，每次取样后补充等体积释放介质以维持体系体积恒定。以取样时间为横坐标，累计释放率为纵坐标，绘制释药曲线。1.9纳米盘对人卵巢癌OVCAR-8细胞的毒性1.9.1近红外光对细胞的毒性将对数生长期的OVCAR-8细胞以每孔5×103个的密度接种于96孔板，贴壁后采用730 nm激光光源对细胞进行照射。设定光辐照强度分别为50、100、300、500、1 000和1 200 mW/cm2，每个强度分别处理不同组别的细胞，照射时间均为3 min。照射完成后，将96孔板置于37 ℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养24 h。随后，弃去培养基，每孔加入含10% CCK-8的DMEM培养基，于细胞培养箱中避光孵育2 h。最后使用酶标仪在450 nm波长下检测各孔吸光度值。1.9.2纳米盘对细胞的毒性将对数生长期的OVCAR-8细胞以每孔5×103个的密度接种于96孔板，贴壁后将培养基更换为含不同浓度磷脂（0.054、0.107、0.215、0.430、0.859、1.719、3.438、6.875 mg/mL）的空白纳米盘或不同浓度（0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μg/mL）PdPC（OBu）8纳米盘的培养基，继续培养24 h。弃去含药培养基，PBS洗涤2次，更换为无药培养基，采用730 nm激光（300 mW/cm2）照射3 min。照射完成后，将96孔板置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养24 h。随后，弃去培养基，每孔加入含10% CCK-8的DMEM培养基，于细胞培养箱中避光孵育2 h。最后使用酶标仪在450 nm波长下检测各孔吸光度值。1.10纳米盘对OVCAR-8细胞的摄取1.10.1共聚焦激光显微镜定性观察细胞摄取将对数生长期的OVCAR-8细胞，以每皿1×105个的密度接种于35 mm共聚焦皿中。细胞贴壁后弃去培养基，分别更换为含游离C6（1 μg/mL）、C6纳米盘（1 μg/mL）和PBS的培养基，继续培养4 h。对光照组进行光照（730 nm，300 mW/cm2，3 min），弃去培养基，PBS洗涤3次，4 %多聚甲醛1 mL固定10 min，PBS洗涤3次，1 μg/mL DAPI 1 mL避光染色10 min，PBS洗涤3次，加入1 mL PBS，于共聚焦激光显微镜下观察。1.10.2纳米盘的细胞摄取机制配制浓度为5×105个/mL 的OVCAR-8细胞悬液，每孔接种2 mL于6孔板中，置于细胞培养箱内培养12 h使细胞贴壁。抑制剂组分别加入200 μL不同抑制剂溶液，包括阿米洛利（amiloride，100 μg/mL）、非律平（filipin，5 μg/mL）、氯丙嗪（chlorpromazine，10 μg/mL）、渥曼青霉素（wortmannin，2 μg/mL）、金雀异黄酮（genistein，100 μg/mL），对照组与4 ℃组加入等体积PBS。细胞培养箱孵育30 min后，每孔加入1 mL 1 μg/mL C6纳米盘溶液。随后，抑制剂组与对照组置于细胞培养箱继续孵育1 h，4 ℃组置于4 ℃环境中孵育1 h。孵育结束后弃掉培养基，PBS洗涤3次，经胰酶消化后1 000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入0.4 mL PBS重悬，使用流式细胞仪进行检测。1.11纳米盘细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）检测配制浓度为3×105个/mL 的OVCAR-8细胞悬液，每孔接种1 mL于24孔板中，待细胞贴壁后弃去培养基，加入200 μL含不同PdPC（OBu）8浓度纳米盘的培养基，继续孵育6 h。弃去含药培养基，换为PBS，光照组进行激光照射（730 nm，300 mW/cm2，3 min）。照射后弃去PBS，加入250 μL DHE溶液（1×），于37 ℃孵育5 min，PBS洗涤3次，置于荧光显微镜下观察细胞染色情况。1.12统计学处理使用Graphgad Prism 10.1.2软件进行统计学分析和作图。数据采用x¯±s表示，两组间比较采用Student's t检验，多组间比较采用单因素方差分析，随后使用Dunnett’s t检验进行多重比较。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1纳米盘的表征马尔文激光粒度仪结果显示，纳米盘的粒径为（63.66 ± 0.27） nm，Zeta电位为（-18.2 ± 2.4） mV，见图1A、1B。在4 ℃条件下储存7 d后，粒径与电位均未发生显著变化（图1C、1D），表明其在低温环境中具有良好的稳定性。透射电子显微镜图像显示纳米盘呈类球状或短棒状形态，分散均匀（图1E）。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F0012.2RAPA HPLC方法学验证2.2.1专属性在HPLC色谱条件下，对照品溶液中RAPA（图2A）出峰良好，保留时间为4.6 min，不含RAPA的空白纳米盘溶液（图2C）在4.6 min处无特异吸收峰，供试品溶液（图2B）在保留时间处出峰良好，无干扰。表明该方法用于检测RAPA的专属性较强。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F002图23种溶液的高效液相色谱图Fig.2HPLC chromatograms of three solutionsA： Reference standard solution； B： Test sample solution； C： Demulsified blank photosensitive nanodisc solution.2.2.2线性关系配制40、20、10、5、2、1、0.5、0.2 μg/mL的RAPA对照品溶液，进行液相色谱分析。以对照品溶液浓度C为横坐标、色谱峰面积A为纵坐标绘制RAPA线性曲线图，线性回归方程为A= 57 062C - 2 130，R²=0.999 9 （n=5）。见图3。结果表明该方法适用于0.2 ~ 40 μg/mL的RAPA的定量检测。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F003图3RAPA HPLC分析的标准曲线Fig.3Calibration curve of RAPA by HPLC analysis2.2.3精密度如表2所示，RAPA在低、中、高3个浓度都具有较好的精密度，日间精密度和日内精密度值的相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）均小于5%，表明该方法可用于含量测定。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.T002表2RAPA HPLC分析的精密度 （n=3，x¯±s）Tab.2Precision of RAPA HPLC analysis （n=3，x¯±s）Added（μg/mL）Within-dayBetween-dayMeasureRSD （%）MeasureRSD （%）0.50.52 ± 0.023.520.53 ± 0.011.762.02.04 ± 0.031.592.04 ± 0.031.4710.09.80 ± 0.141.439.84 ± 0.080.852.2.4重复性、稳定性和加样回收率在HPLC色谱条件下，供试品溶液中RAPA浓度为（11.72 ± 0.15）μg/mL，RSD=1.31% （n=6），表明本方法重复性良好。在24 h内，室温放置的对照品溶液中RAPA浓度由2.07 μg/mL降至2.04 μg/mL，变化率为-1.45%（RSD=0.88%），表明该溶液在此条件下稳定性良好。采用加样回收的方法，在已知含量的样品中添加空白纳米盘溶液，色谱分析结果由表3可知，RAPA在低、中、高3个浓度的回收率在85% ~ 115%范围内，且RSD值均小于5%，表明该提取方法稳定可靠。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.T003表3RAPA HPLC分析的加样回收率 （n=3，x¯±s）Tab.3Recovery of RAPA by HPLC analysis （n=3，x¯±s）Added （μg/mL）Measured （μg/mL）Recovery （%）RSD （%）0.50.45 ± 0.0289.73.502.01.83 ± 0.0491.72.2710.09.43 ± 0.0994.30.902.3纳米盘溶液中1O2的检测如图4A所示，DPBF探针溶液在光照前的荧光强度约为370，经730 nm近红外光（300 mW/cm2）照射1 min后，其荧光强度迅速降至10左右。这一结果归因于纳米盘中的PdPC（OBu）₈在近红外光激发下产生1O2，所产生的1O2氧化并破坏了DPBF的分子结构［13］，导致其荧光强度下降，由此证实了该纳米盘具有良好的1O2生成能力。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F004图4纳米盘的光敏响应释放Fig.4Photo-responsive release of nanodiscsA： Near-infrared light-induced changes in DPBF fluorescence intensity； B： Cumulative release rate of RAPA from nanodiscs at different time points； ***P0.001 vs No irradiation group.2.4纳米盘的光敏响应释放采用反向透析法考察纳米盘在近红外光照射下的药物释放行为。在近红外光照射时，纳米盘中的PdPC（OBu）₈可产生大量1O2。产生的1O2可氧化脂质膜中DLPC等不饱和磷脂的碳碳双键，引发脂质过氧化。这种氧化破坏会显著影响脂质膜的完整性和稳定性，从而促进包载药物的响应性释放。结果如图4B所示，非光照组RAPA释放缓慢；而光照组施加730 nm近红外光（300 mW/cm2）照射5 min后，4 h、8 h、12 h时RAPA的累计释放率均明显高于非光照组（t=15.49、93.66、60.28，均P0.001），表明该纳米盘具有良好的近红外光响应释药性能。2.5纳米盘细胞内ROS检测由图5可知，PBS对照组在光照前后均未检测到明显红色荧光。在未光照时，纳米盘组的红色荧光强度随PdPC（OBu）8浓度升高而增强，提示其可产生一定量ROS。近红外光照射后，即使在PdPC（OBu）8浓度为0.1 μg/mL时，纳米盘产生较多ROS，荧光信号显著增强，且ROS生成量与PdPC（OBu）8浓度呈正相关。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F005图5不同PdPC（OBu）8浓度纳米盘的DHE染色（730 nm，300 mW/cm2，3 min） ×100Fig.5DHE staining of nanodiscs with different concentrations of PdPC（OBu）8 （730 nm， 300 mW/cm²， 3 min） ×1002.6纳米盘对OVCAR-8细胞的毒性采用不同光辐照强度的730 nm激光对OVCAR-8细胞进行照射，每个辐照强度照射时间都为3 min，再通过CCK-8法检测不同光照强度对OVCAR-8细胞的毒性。结果发现即使光辐照强度达到1 200 mW/cm2，细胞活力仍不低于90%（图6A），表明以上光辐照强度对OVCAR-8细胞几乎没有毒性。未负载PdPC（OBu）8的纳米盘本身对OVCAR-8细胞无显著毒性（图6B）；负载PdPC（OBu）8后，纳米盘未光照时其IC50为32.15 μg/mL，光照后其IC50小于0.125 μg/mL（图6C），光照后其细胞毒性显著增强。该结果说明，光照可通过激活光敏剂PdPC（OBu）8促进¹O₂生成，从而显著增强其对肿瘤细胞的杀伤效果。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F006图6纳米盘的体外抗卵巢癌活性（n=5）Fig.6In vitro anti-ovarian cancer activity of nanodiscs （n=5）A： Cytotoxicity of near-infrared light at different irradiation intensities against OVCAR-8 cells； B： Cytotoxicity of nanodiscs with different phospholipid concentrations against OVCAR-8 cells； C： Cytotoxicity of nanodiscs with different concentrations of PdPC（OBu）₈ against OVCAR-8 cells with or without light irradiation.2.7共聚焦激光显微镜定性观察细胞摄取如图7所示，游离C6组的荧光明显，C6纳米盘组的荧光相对较弱，C6纳米盘光照组光照后荧光显著增强，但荧光仍弱于游离C6组。虽然纳米盘在光照前已经完成了细胞摄取过程，但C6纳米盘光照组荧光强于C6纳米盘组，可能是纳米盘光照后释放出C6，从而使荧光增强。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F007图7纳米盘的细胞摄取 （730 nm，300 mW/cm2，3 min） ×800Fig.7Cellular uptake of nanodiscs （730 nm， 300 mW/cm²， 3 min） ×8002.8纳米盘的细胞摄取机制阿米洛利、非律平、氯丙嗪、渥曼青霉素与金雀异黄酮分别作为胞饮、小窝蛋白介导内吞、网格蛋白介导内吞、胞饮/网格蛋白以及网格蛋白/小窝蛋白内吞途径的抑制剂。如图8所示，阿米洛利与非律平抑制剂组的C6相对摄取量未见显著变化，表明纳米盘进入细胞不依赖于胞饮与小窝蛋白介导的内吞途径。氯丙嗪、渥曼青霉素与金雀异黄酮抑制剂组的C6相对摄取量分别为（84.2 ± 0.6）%、（78.9 ± 1.3）%和（70.8 ± 1.9）%，较对照组均降低（均P0.001），说明上述抑制剂通过干扰网格蛋白途径有效抑制了纳米盘在OVCAR-8细胞中的摄取。此外，4 ℃低温条件下的C6相对摄取量降至（62.0 ± 1.3）%（P0.001），提示该过程为能量依赖性。综上所述，纳米盘主要通过网格蛋白介导的能量依赖型内吞途径进入细胞。10.19405/j.cnki.issn1000–1492.2026.06.004.F008图8纳米盘的内吞抑制率Fig.8Endocytosis inhibition rate of nanodiscs***P0.001 vs Control group.3讨论近年来，光响应纳米材料因其优异的光控特性与高时空精度调控能力，在肿瘤治疗领域备受关注［10–12］。该类材料能够在特定波长光照下发生物理或化学变化，实现药物的定向释放、基因的高效递送或免疫微环境的局部调控［13］。脂质纳米盘兼具生物相容性佳、小尺寸易穿透肿瘤基质的优势，与光响应技术结合为优化肿瘤药物递送提供了新策略［14］。本研究旨在构建一种新型光敏纳米盘，用于实现RAPA的精准释放，并初步探究其体外抗卵巢癌效果。本研究采用薄膜水化法成功构建了光敏纳米盘，所得制剂粒径均一，Zeta电位适宜，且表现出良好的稳定性。建立的HPLC分析方法各项验证指标均符合要求，可有效实现RAPA的含量测定和释药行为分析。DHE实验结果也验证了其可在光照后产生大量1O2并具有浓度依赖性。此外，该纳米盘本身无显著细胞毒性，仅在光照后表现出浓度依赖性抗肿瘤效果，兼具良好的安全性与光控特异性。进一步的机制研究表明，该光敏纳米盘主要通过网格蛋白介导的能量依赖型内吞途径进入OVCAR-8细胞，保证了高效的细胞内化效率，光照后可实现胞内精准释药，解决了传统纳米载体胞内释药效率低的问题。该制剂的核心创新在于将脂质纳米盘的结构优势与光响应特性结合，相较于传统光控纳米载体，其小尺寸与独特的盘状结构更易穿透肿瘤致密基质，实现药物向肿瘤深部递送；而光敏修饰赋予其近红外光触发的释药特性，能够在肿瘤局部实现RAPA的时空精准释放。同时，PdPC（OBu）₈介导的光动力效应与药物释放形成协同作用，光照后既通过1O2氧化脂质膜触发释药，又在细胞内诱导ROS大量生成杀伤肿瘤细胞。但本研究仅完成体外实验，未开展体内相关评价，也未探究RAPA对On-switch CAR-T系统的调控作用。后续将重点开展体内实验，考察制剂在动物模型中的抗肿瘤效果与生物安全性；RAPA调控On-switch CAR-T系统的免疫联合治疗研究，也将作为后续核心方向深入开展。综上所述，本研究成功制备了雷帕霉素光敏纳米盘，该制剂理化性质稳定、光控释药特性显著，且在体外展现出良好的抗卵巢癌活性与生物安全性，为实现抗肿瘤药物的时空精准递送提供了新型纳米制剂策略，也为脂质纳米盘在光响应载药系统中的研发与应用提供了实验依据。